[发明专利]一种用于核酸适配体筛选的试剂盒及其使用、检测方法

摘要

本发明公开了用于核酸适配体筛选的试剂盒，其原料包括：磁铁、链霉亲和素修饰磁珠、核酸文库、短序列、PCR预混液、ePCR微液滴生成油、荧光定量PCR预混液、分子量标准样。本发明还公开了上述用于核酸适配体筛选的试剂盒的使用方法，包括如下步骤：S1、将核酸文库固定至磁珠上；S2、筛选；S3、PCR扩增；S4、制备ssDNA；S5、多轮筛选。本发明还公开了一种检测磁珠法筛选的核酸适配体与靶标结合率的方法。本发明缩短了筛选周期，节省了筛选时间，简化实验流程，重复性好，筛选效率高。

主权项

1.一种用于核酸适配体筛选的试剂盒，其特征在于，其原料包括：磁铁、链霉亲和素修饰磁珠、核酸文库、短序列、PCR预混液、ePCR微液滴生成油、荧光定量PCR预混液、分子量标准样；其中，核酸文库为碱基个数为60‑100个的单链DNA，由正向引物、随机序列和反向引物构成，其中，正向引物和反向引物的碱基个数均为18‑22个；短序列的3’端进行了生物素修饰，短序列与核酸文库的正向引物的碱基反向互补配对；PCR预混液的原料包括：100μM的荧光修饰的核酸文库正向引物5μL，100μM的polyA修饰的核酸文库反向引物5μL，10mM的dNTP20μL，5U/μL的DNA聚合酶4μL，10×DNA聚合酶缓冲液100μL，加重蒸水至1000μL；ePCR微液滴生成油包括：EM90 1.93g，Triton X‑100 36.5mg，矿物油35.32g；荧光定量PCR预混液的原料包括：100μM核酸文库的正向引物5μL，100μM核酸文库的反向引物5μL，10mM的dNTP20μL，5U/μL的DNA聚合酶4μL，10×DNA聚合酶缓冲液100μL，荧光染料，加重蒸水至1000μL。