[发明专利]一种高效抗癌蛹虫草的生产方法

摘要

本发明公开了一种高效抗癌蛹虫草及其生产方法，该方法生产的蛹虫草子实体，用高效液相色谱法定量检测，含喷司他丁≥0.1%，虫草素≥0.1%，而且非常稳定，储存10年内活性成分含量不变。

主权项

1.一种高效抗癌蛹虫草及其生产方法，其特征在于：包括以下步骤：S1：培养内源高表达虫草素的蛹虫草幼苗；S2：用链霉菌制备异源高表达喷司他丁的液体种；S3：异源与内源适时对接与共生培养；培养内源高表达虫草素的蛹虫草幼苗包括以下步骤：S101：配制固体培养基和营养液，所述固体培养基的制备方法是取小麦、莜麦、稻谷三种主料中的一种或者各取三分之一，装入培养容器内，装量为培养容器容积的6~24%，所述营养液的制备方法是马铃署200g、蔗糖20g、磷酸二氢钾3g、硫酸镁1.5g、干松针20g、鲜蚕蛹（捣烂）100g加水煮溶取滤液，再加入腺嘌呤1g、甘氨酸16g加水至1000mL；S102：制备培养基，将固体培养基与营养液混匀分装于培养器中，120℃灭菌1.5小时；S103：将各培养器冷却至30℃以下时，在每个培养器内接入蛹虫草母种0.3‑0.5cm²菌块3‑5块，之后用聚丙烯塑料膜封口，将其置于培养室内变温变光培养35‑42天，每日通风一次，每次0.5‑1小时，准备异源对接。变温变光具体为：接种封口后前3‑7天内闭光培养，温度为16‑18℃；8‑15天时光照强度为100‑200Lx、温度为14‑20℃，每天光照时间为12小时；长出子座后，每6小时转换一次光照强度，转换顺序依次为500Lx、1000Lx、1500Lx、2000Lx，温度为18‑22℃；用链霉菌制备异源高表达喷司他丁的液体种包括以下步骤：S201：制备链霉菌液体培养基，所述链霉菌液体培养基的制备方法为水100ml、葡萄糖4g、麦芽粉10g、磷酸铵2g、氨基核糖0.3mg、PH值为6.9‑7.2，煮溶取滤液，分装在多个三角瓶中，每个三角瓶内的装量为150mL/500mL，封口，120℃下灭菌20min；S202：链霉菌种的静态和动态培养及保藏，具体地，在每个三角瓶内接入链霉菌母种0.5‑1cm²的菌块2‑3块，载于液面，之后将三角瓶置于恒温箱中静置培养48‑72小时，恒温箱的温度为28‑30℃，当白色孢子散发于液面时，将三角瓶置于摇瓶机上动态培养，温度保持在28‑30℃，摇瓶机的转速为250r/min，光照强度为100‑200Lx，培养时长为4‑6天，形成异源高表达喷司他丁的液体种，将三角瓶置于冰箱内保存，保持温度为4‑6℃，保藏时长为60小时；异源与内源适时对接与共生培养包括以下步骤：S301：在S103中35‑42天的培养中，当蛹虫草子实体幼苗为3‑4cm高，正值旺盛期孕育子囊孢子时，及时接入S2中用链霉菌制备异源高表达喷司他丁的液体种，具体地，每个三角瓶内均加入无菌水，加入量为异源高表达喷司他丁的液体种的3‑4倍量，摇匀后再接入到蛹虫草子实体培养容器内，接入量为固体培养基内主料的1.2‑1.4倍量，之后封口；S302：将蛹虫草子实体培养容器置于培养室内进行变温变光共生培养，培养时长为10‑15天，每天通风一次，每次通风0.5‑1小时。变温变光具体为：前7‑12天内，每天以100‑200Lx的光照强度光照12小时，温度为20‑25℃；最后3天要求每天以500‑1000Lx的光照强度光照12小时，保持恒温25℃；S303：当蛹虫草子实体培养基转为灰白色至黄褐色，蛹虫草子实体为4~6cm高并将要散发孢子时，及时采收；S304：加工保藏：将采收的蛹虫草子实体晾干表水，再用20%的干松针水配80%的60度白酒配置的液体均匀喷酒于蛹虫草子实体上，以60℃的温度将其烘干至含水量≤12%后封存。