[发明专利]一种基因编辑系统及其在新金色分枝杆菌中的应用在审
| 申请号： | 201910225056.X | 申请日： | 2019-03-25 |
| 公开（公告）号： | CN109971789A | 公开（公告）日： | 2019-07-05 |
| 发明（设计）人： | 饶志明;童丽珍;江文慧;李施琼;刘秋林;刘栗彤;林春;邵明龙 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;C12N15/74;C12N1/21;C12R1/32 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 林娟 |
| 地址： | 214000 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基因编辑系统及其在新金色分枝杆菌中的应用，属于基因工程技术领域以及生物工程技术领域。此系统可达到对新金色分枝杆菌进行基因编辑的目的，其工作机制如下：先将pML‑Cpf1质粒导入新金色分枝杆菌中，使得pML‑Cpf1质粒上的Cpf1基因、编码DNA末端结合蛋白mku的基因以及编码DNA连接酶LigD的基因表达，然后将pJM‑crRNA质粒导入新金色分枝杆菌中，使得pJM‑crRNA质粒转录生成crRNA序列，crRNA序列会与Cpf1基因结合形成复合物，此复合物会靶向并切割需编辑基因使得新金色分枝杆菌中需编辑的基因被敲除。 | ||
| 搜索关键词： | 金色分枝杆菌 基因 质粒 编辑系统 编码DNA 复合物 生物工程技术领域 基因工程技术 工作机制 基因表达 基因结合 结合蛋白 转录 此系统 连接酶 靶向 敲除 切割 应用 | ||
【主权项】：
1.一种可用于基因编辑的质粒，其特征在于，所述质粒包含pMV261表达载体、Cpf1基因、Pj23119启动子以及NHEJ修复基因，命名为pML‑Cpf1质粒；所述pMV261表达载体上的Hsp60启动子被替换为了Tac启动子；所述NHEJ修复基因包含编码DNA末端结合蛋白mku的基因以及编码DNA连接酶LigD的基因；所述Cpf1基因位于pMV261表达载体的Tac启动子的下游以及pMV261表达载体的rrnB终止子上游，由Tac启动子驱动表达；所述Pj23119启动子位于pMV261表达载体的KanR抗性基因的下游；所述NHEJ修复基因位于Pj23119启动子的下游以及pMV261表达载体的复制起点(ori)的上游，由Pj23119启动子驱动表达。
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