[发明专利]一种大叶落地生根的组织培养方法

摘要

本发明涉及离体培养的技术领域，特别是涉及一种大叶落地生根的组织培养方法，其可以实现大批量培养，方便对生长情况进行控制，为大叶落地生根的快速繁殖及种质资源的保存提供新的途径；包括以下步骤：(1)材料的获得；(2)无菌处理；(3)愈伤组织诱导；(4)愈伤组织分化；(5)不定芽增殖；(6)生根培养；(7)炼苗与移栽；(8)移栽培养。

主权项

1.一种大叶落地生根的组织培养方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)材料的获得：摘取大叶落地生根新鲜的健康叶片，在自来水下冲洗表面20min；(2)无菌处理：将冲洗完成后的叶片在无菌操作台上用75％的酒精浸泡15s，浸泡完成后用无菌水冲洗1次，然后浸泡于0.1％的升汞溶液中消毒6min，消毒完成后再用无菌水冲洗3‑5次，最后用消毒滤纸吸干叶片表面的水分，再将叶片切成约1.0cm*1.0cm的大小；(3)愈伤组织诱导：将无菌处理完成后的切割后的叶片接种至愈伤组织诱导培养基上；(4)愈伤组织分化：愈伤组织诱导4周后切取生长健壮的愈伤组织转接到愈伤组织分化培养基上，诱导产生不定芽；(5)不定芽增殖：愈伤组织分化诱导4周后切取有不定芽的愈伤组织转接到芽增殖培养基上，在一定培养温度和光照条件下进行继代培养，一个月后，芽体长至5cm时，继续选取生长健壮的不定芽，剪段转接到芽增殖培养基上继代扩繁；(6)生根培养：将不定芽增殖培养出的芽体嫩茎剪成2‑3cm的小段，接种至生根培养基中，在一定培养温度和光照条件下进行生根培养；(7)炼苗与移栽：待多数试管苗生出3‑7条根后，将高3cm并且具有3‑7条根的试管苗逐步移到散射光的自然环境中进行炼苗7天后，将幼苗取出，用温水清洗幼苗根部的培养基，并将幼苗移栽至装腐殖质的花盆或穴盘中；(8)移栽培养：将幼苗移栽完成后，控制培养地点的湿度为85％±2％、温度为26℃±1℃下再次进行炼苗。