[发明专利]一种双sgRNA位点敲除INS基因的CRISPR/Cas9系统与应用

摘要

本发明属于生物工程技术领域，特别涉及肿瘤发生、发展相关基因敲除方法，具体涉及一种双sgRNA位点敲除INS基因的CRISPR/Cas9系统与应用；本发明首次双位点敲除法，采用在同一外显子上设计两个sgRNA序列，针对该外显子上两个位点进行切割，可高效敲除INS基因，且只需PCR、电泳即可确定是否敲除成功，大大降低了敲除后鉴定成本，且敲除后只有一种突变型，大大增加了敲除结果的稳定性；将含有所述sgRNA的CRISPR/Cas9系统转染细胞，可获得敲除INS基因的细胞株。

主权项

1.一种敲除INS基因的sgRNA，其特征在于，包括INS sgRNA‑1和INS sgRNA‑2；所述INS sgRNA‑1的序列如下：INS sgRNA‑1：CCACCAGGTGTGAGCCGCAC；INS sgRNA‑1 oligo1：5’‑caccgCCACCAGGTGTGAGCCGCAC‑3’；INS sgRNA‑1 oligo2：5’‑aaacGGAGGGGAACTTCCTACACCc‑3’；所述INS sgRNA‑2的序列如下：INS sgRNA‑2：TACCTAGTGTGCGGGGAACG；INS sgRNA‑2 oligo1：5’‑caccgTACCTAGTGTGCGGGGAACG‑3’；INS sgRNA‑2 oligo2：5’‑aaacCGTTCCCCGCACACTAGGTAc‑3’。