[发明专利]特异性靶向YBX1基因的sgRNAs及其应用在审
| 申请号： | 201910245409.2 | 申请日： | 2019-03-28 |
| 公开（公告）号： | CN109943566A | 公开（公告）日： | 2019-06-28 |
| 发明（设计）人： | 鲁济真;杨兴林;刘晓芬;马佩敏;夏清梅 | 申请（专利权）人： | 和元生物技术（上海）股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/867;C12N15/90;C12N5/10 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 陆惠中;王永伟 |
| 地址： | 201321 上海市浦东*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了特异性靶向YBX1基因的sgRNAs及其在提高腺相关病毒产毒效率中的应用。本发明首先获得特异性靶向YBX1基因第一内含子、第三内含子的sgRNAs序列；其次分别构建YBX1基因的两条sgRNAs到慢病毒载体系统，该载体表达Cas9蛋白；同时构建LoxP供体载体质粒，LoxP两端加Cas9剪切位点上下游各800bp的同源臂，LoxP中间添加含有第二外显子的切除片段，最后将三种载体质粒共同转染293T细胞，药筛后获得重组细胞，再转入Cre质粒，获得YBX1第二外显子缺失的敲除细胞株。所获得的YBX1的293T敲除细胞株具有产毒能力明显高于未敲除细胞的优势。本发明具有位点可控、操作步骤简单、sgRNA靶向性好，且对YBX1基因切割效率高；并能明显提高293T细胞的产AAV的能力，为基础研究和临床应用提供更好的细胞工具。 | ||
| 搜索关键词： | 特异性靶向 基因 敲除 细胞 内含子 细胞株 构建 质粒 慢病毒载体系统 外显子缺失 腺相关病毒 产毒能力 供体载体 基础研究 剪切位点 临床应用 切割效率 载体表达 载体质粒 重组细胞 靶向性 同源臂 外显子 可控 位点 药筛 转染 切除 应用 蛋白 转入 | ||
【主权项】：
1.一对特异性靶向YBX1基因第一内含子的sgRNA1和第三内含子的sgRNA2，其特征在于，所述sgRNA1的序列如SEQ ID NO.1所示：TTTCCAAATCCGCCCGGCTT所述sgRNA2的序列如SEQ ID NO.2所示：CCTGCTCTGTCGGCTTCTCG。
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