[发明专利]一种新城疫基因VII型DNA纳米颗粒疫苗及制备及应用

摘要

本发明涉及疫苗技术领域，特别涉及一种新城疫基因VII型DNA纳米颗粒疫苗及制备及应用。本发明以壳聚糖为载体材料，MgSO4、三聚磷酸钠作为交联剂，通过离子交联法制备出新城疫基因VII型DNA纳米颗粒疫苗。该疫苗表面没有明显的空隙，呈良好规则的圆形，具有良好的分散性，且没有聚集和沉降损伤，平均粒径为240.8±7.4nm，Zeta电位为25.0±1.5mV，纳米颗粒的包封率为92.3±0.56％。可点眼滴鼻免疫诱导黏膜免疫应答，可较好用于鸡新城疫免疫，且成本低，为新型的DNA疫苗研制奠定基础。

主权项

1.一种新城疫基因VII型DNA纳米颗粒疫苗的制备方法，其特征在于包含如下步骤：(1)将pH为4.5～6.5、壳聚糖浓度为0.5～1.5mg/mL的壳聚糖/乙酸溶液600～900rpm磁力搅拌5～10min；然后逐滴加入浓度为250～1000ng/μL的重组载体pCAGGS‑F溶液，600～900rpm磁力搅拌3～5min；再加入pH为4.5～6.5、MgSO₄/浓度为0.5～1.5mg/mL的MgSO₄/乙酸溶液，600～900rpm磁力搅拌3～5min；最后加入pH为4.5～6.5、TPP浓度为0.5～1.5mg/mL的TPP/乙酸溶液，700～1000rpm磁力搅拌30～40min；(2)搅拌反应后，低温离心，弃上清，收集沉淀；(3)采用预冷的ddH₂O重悬沉淀，混匀，超声破碎，得到新城疫基因VII型DNA纳米颗粒疫苗溶液；(4)新城疫基因VII型DNA纳米颗粒疫苗冻干处理，得到新城疫基因VII型DNA纳米颗粒疫苗。