[发明专利]一种HMGB1封闭性抗体的制备方法及其应用在审
| 申请号： | 201910258174.0 | 申请日： | 2019-04-01 |
| 公开（公告）号： | CN109957015A | 公开（公告）日： | 2019-07-02 |
| 发明（设计）人： | 王红阳;李亮;陈磊;陈昕;凌妍 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军海军军医大学国家肝癌科学中心 |
| 主分类号： | C07K16/18 | 分类号： | C07K16/18;C07K1/22;A61K39/395;A61K9/00;A61P1/16 |
| 代理公司： | 上海申新律师事务所 31272 | 代理人： | 车超平 |
| 地址： | 201805 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种HMGB1封闭性抗体的制备方法，其包括：将免疫原在大肠杆菌中过表达，并采用Ni‑亲和色谱法进行纯化；采用免疫原免疫BALB/C小鼠，选取具有最佳免疫应答的小鼠进行融合；将小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合以产生杂种细胞，并培养克隆，选择稳定的克隆；将杂种细胞注射到小鼠的腹膜腔中，收集10‑14天后的腹水，进行抗体筛选和测试，采用蛋白A/G亲和层析或抗原亲和层析以纯化腹水液，获得HMGB1封闭性抗体，并对抗体的封闭性效果进行验证。本发明还涉及上述制备方法制得的HMGB1封闭性抗体及其应用。本发明通过中和性抗体封闭HMGB1的作用，能够有效缓解由非酒精性脂肪肝导致的肝脏炎症，为将来临床应用HMGB1中和性抗体治疗非酒精性脂肪肝提供理论和实验证据。 | ||
| 搜索关键词： | 封闭性抗体 制备 非酒精性脂肪肝 中和性抗体 杂种细胞 免疫原 小鼠 克隆 免疫BALB/C小鼠 抗原亲和层析 大肠杆菌 理论和实验 亲和色谱法 小鼠脾细胞 肝脏炎症 抗体筛选 临床应用 免疫应答 亲和层析 有效缓解 封闭性 融合 腹膜腔 腹水液 腹水 应用 蛋白 注射 验证 测试 对抗 封闭 证据 治疗 | ||
【主权项】：
1.一种HMGB1封闭性抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤a、选取SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示序列中的至少一种作为免疫原，将所述免疫原在大肠杆菌中过表达，并采用Ni‑亲和色谱法进行纯化；步骤b、将步骤a中纯化后的免疫原免疫BALB/C小鼠，选取具有最佳免疫应答的小鼠，进行融合；步骤c、将步骤b中的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合以产生杂种细胞，并稀释该杂种细胞混合物，在培养基中培养克隆，选择稳定的克隆；步骤d、将杂种细胞注射到小鼠的腹膜腔中，收集10‑14天后的腹水，采用蛋白A/G亲和层析或抗原亲和层析以纯化腹水液，获得HMGB1封闭性抗体。
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