[发明专利]一种产肌氨酸氧化酶菌株的筛选方法在审

专利信息
申请号: 201910270719.X 申请日: 2019-04-04
公开(公告)号: CN109897805A 公开(公告)日: 2019-06-18
发明(设计)人: 迟乃玉;刘洋;张庆芳;于爽;希伦 申请(专利权)人: 大连大学
主分类号: C12N1/20 分类号: C12N1/20;C12R1/07
代理公司: 大连八方知识产权代理有限公司 21226 代理人: 朱秀芬
地址: 116622 辽*** 国省代码: 辽宁;21
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摘要: 发明涉及细菌筛选的技术领域,具体是一种产肌氨酸氧化酶菌株的筛选方法。所述方法为:将获取的海洋来源样品悬浮液用无菌水稀释,稀释后分不同梯度涂布在筛选培养基上,并放置在温度为20‑30℃恒温下进行培养4‑5天,后挑取含有透明圈的细菌菌落,通过三区划线进行分离纯化,获得单一菌落,而后测定酶活,最终挑选一株酶活最高的产肌氨酸氧化酶的菌株,进行菌种保存,即为目的菌株。本发明方法能够快速、准确的筛选出产肌氨酸氧化酶的细菌,所获得的菌株具有产量高、效率快且酶活高的特点,酶活高达120~160U/L,并且具有低温生长产酶酶活较高的优势,有利于后一步进行医学检测应用方面研究。
搜索关键词: 菌株 酶活 肌氨酸氧化酶 筛选 稀释 筛选培养基 低温生长 分离纯化 海洋来源 菌种保存 细菌菌落 细菌筛选 医学检测 透明圈 无菌水 悬浮液 菌落 产酶 划线 细菌 应用 研究
【主权项】:
1.一种产肌氨酸氧化酶菌株的筛选方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:(1)将海洋来源样品接入富集培养基中培养,温度设置在20‑30℃恒温培养,同时每天测肌酸降解率,待肌酸降解至80%以上时,再培养2天;(2)产肌氨酸氧化酶菌株的分离:将步骤(1)中肌酸已降解完全的培养基,用无菌水稀释,稀释后涂布在筛选培养基中,温度设置在20‑30℃条件下恒温培养4‑5天;(3)产肌氨酸氧化酶菌株的初筛:挑取有透明圈的细菌菌落,通过三区划线进行分离纯化,温度设置在20‑30℃条件下恒温培养4‑5天,获得单一菌落,进行镜检,通过观察菌落形态,初步鉴定菌种;(4)产肌氨酸氧化酶菌株的复筛:测定酶活,最终挑选一株产肌氨酸氧化酶酶活最高的的菌株,进行菌种保存,即筛选出目标菌株。
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