[发明专利]一种基于单分子荧光成像的细胞内miRNA定量方法在审
| 申请号： | 201910270772.X | 申请日： | 2019-04-04 |
| 公开（公告）号： | CN110229870A | 公开（公告）日： | 2019-09-13 |
| 发明（设计）人： | 苏昕;李丽娜;邓莹楠;王丛珊;付胜男 | 申请（专利权）人： | 北京化工大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;G01N21/64 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 王春霞 |
| 地址： | 100029 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种细胞内miRNA定量方法。所述方法包括如下步骤：(1)离体的细胞经固定后进行细胞核染色；(2)向细胞中加入含有荧光探针的缓冲液，荧光探针与细胞内待检测miRNA发生可逆结合；(3)将细胞置于TIRF显微镜的载物台上进行检测，在明场下记录细胞形态，在宽场荧光记录细胞核位置，在HILO模式下记录单分子荧光强度‑时间轨迹；(4)通过信号过滤，获得单分子荧光强度‑时间轨迹呈现ON‑OFF交替变化的单分子成像图，即为所述细胞内miRNA单分子成像图，经计数即得到细胞内miRNA的数量。本发明提供了一种“原位定量成像”的方式，利用高辨识度的单分子动力学指纹信号，对细胞内miRNA进行单分子定位与精准计数，突破胞内miRNA定量依赖于RNA提取的技术瓶颈。 | ||
| 搜索关键词： | 细胞 单分子荧光 时间轨迹 荧光探针 成像图 单分子 单分子荧光成像 单分子动力学 单分子定位 细胞核染色 细胞核位置 技术瓶颈 交替变化 可逆结合 细胞形态 信号过滤 荧光记录 原位定量 指纹信号 辨识度 缓冲液 检测 显微镜 记录 宽场 离体 载物 成像 | ||
【主权项】：
1.一种细胞内miRNA定量方法，包括如下步骤：(1)离体的细胞经固定后进行细胞核染色；(2)向所述细胞中加入含有荧光探针的缓冲液，所述荧光探针与所述细胞内待检测miRNA发生可逆结合；(3)将所述细胞置于TIRF显微镜的载物台上进行检测，在明场下记录细胞形态，在宽场荧光记录细胞核位置，在HILO模式下记录单分子荧光强度‑时间轨迹；(4)通过信号过滤，获得单分子荧光强度‑时间轨迹呈现ON‑OFF交替变化的单分子成像图，即为所述细胞内miRNA单分子成像图，经计数即得到所述细胞内miRNA的数量。
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