[发明专利]一种曼氏无针乌贼原始生殖细胞的标记方法在审
| 申请号： | 201910275880.6 | 申请日： | 2019-04-08 |
| 公开（公告）号： | CN110117618A | 公开（公告）日： | 2019-08-13 |
| 发明（设计）人： | 周易航;关云飞;路宽 | 申请（专利权）人： | 沧州硕金生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/89 | 分类号： | C12N15/89 |
| 代理公司： | 北京国翰知识产权代理事务所(普通合伙) 11696 | 代理人： | 卫翠婷 |
| 地址： | 061000 河北省沧州市*** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | 本发明提供一种曼氏无针乌贼原始生殖细胞的标记方法，属于基因标记技术领域，包括，收集1‑细胞期的曼氏无针乌贼受精卵；双酶切插入PGEM‑T easy载体的扩增Vasa 3’UTR片段产物和/或EGFP基因扩增产物，连接；将连接所得产物用Sal I酶线性化处理，并体外合成Vasa 3’UTR mRNA；将所得Vasa 3’UTR mRNA注射于受精卵进行标记。本发明标记方法通过注射GFP融合Vasa基因合成的Vasa 3’UTR mRNA到早期受精卵，使GFP在PGCs中特异表达从而使得PGCs得到标记，能够对分离冷冻前的曼氏无针乌贼原始生殖细胞进行活体标记，准确度高，技术简便，周期短用途广。 | ||
| 搜索关键词： | 曼氏无针乌贼 原始生殖细胞 受精卵 注射 线性化处理 活体标记 基因标记 基因合成 扩增产物 特异表达 准确度 双酶切 细胞期 并体 扩增 冷冻 合成 融合 | ||
【主权项】：
1.一种曼氏无针乌贼原始生殖细胞的标记方法，采用Vasa基因为标记基因，其特征在于：包括，收集1‑细胞期的曼氏无针乌贼受精卵；双酶切插入PGEM‑T easy载体的扩增Vasa3’UTR片段产物和/或EGFP基因扩增产物，连接；将连接所得产物用Sal I酶线性化处理，并体外合成Vasa3’UTR mRNA；将所得Vasa3’UTR mRNA注射于受精卵进行标记。
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