[发明专利]含有A/B型嵌合HA质粒的嵌合病毒株和嵌合减毒株拯救方法在审
申请号: | 201910276234.1 | 申请日: | 2019-04-08 |
公开(公告)号: | CN109913496A | 公开(公告)日: | 2019-06-21 |
发明(设计)人: | 高玉伟;赵梦琳;孙伟洋;于志君;王铁成;冯娜;赵永坤;张雪梅;杨松涛;夏咸柱 | 申请(专利权)人: | 军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所 |
主分类号: | C12N15/85 | 分类号: | C12N15/85;C12N7/01;C12N7/04;C12R1/93 |
代理公司: | 西安知诚思迈知识产权代理事务所(普通合伙) 61237 | 代理人: | 麦春明 |
地址: | 130117 吉林省长*** | 国省代码: | 吉林;22 |
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摘要: | 本发明公开了一种含有A/B型嵌合HA质粒的嵌合病毒株和嵌合减毒株拯救方法,先对H5亚型流感2.3.4.4谱系的HA序列进行碱性裂解位点改造,使其由高致病性病毒变为低致病性病毒,然后合成H5亚型流感2.3.4.4谱系的HA基因,以合成的HA基因和构建好的pBD‑Ya1688‑HA转染质粒为模板,设计并合成构建A/B型嵌合HA质粒的扩增引物,其次采用无缝克隆方法将H5亚型流感病毒的HA基因定向克隆到pBD‑Ya1688‑HA转染质粒中,形成A/B型嵌合HA质粒,最后利用A/B型嵌合HA质粒拯救含有A/B型嵌合HA质粒的嵌合病毒株和嵌合减毒株。解决了流感减毒疫苗容易引起毒力返祖的问题。 | ||
搜索关键词: | 嵌合 质粒 嵌合病毒 减毒株 流感 合成 构建 转染 低致病性病毒 高致病性病毒 流感病毒 定向克隆 减毒疫苗 扩增引物 裂解位点 质粒拯救 毒力 克隆 改造 | ||
【主权项】:
1.含有A/B型嵌合HA质粒的嵌合病毒株拯救方法,其特征在于,具体步骤如下:步骤S1、合成H5亚型流感2.3.4.4谱系的HA基因;步骤S2、构建A/B型嵌合HA质粒:以合成的H5亚型流感2.3.4.4谱系的HA基因和构建好的B型流感病毒B/Yamagata/16/88 8质粒反向遗传操作系统中的pBD‑Ya1688‑HA转染质粒为模板,设计并合成构建A/B型嵌合HA质粒的扩增引物,最后采用无缝克隆方法将H5亚型流感病毒的HA基因定向克隆到pBD‑Ya1688‑HA转染质粒中,形成A/B型嵌合HA质粒;步骤S3、采用A/B型嵌合HA质粒拯救含有A/B型嵌合HA质粒的嵌合病毒株。
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