[发明专利]一种肠道外泌体提取方法在审
| 申请号： | 201910278835.6 | 申请日： | 2019-04-09 |
| 公开（公告）号： | CN110004110A | 公开（公告）日： | 2019-07-12 |
| 发明（设计）人： | 狄文娟;周逸婵;夏凡;丁国宪 | 申请（专利权）人： | 江苏省人民医院（南京医科大学第一附属医院） |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 南京乐羽知行专利代理事务所(普通合伙) 32326 | 代理人： | 缪友建 |
| 地址： | 210029 江苏省南京市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明提供一种肠道外泌体提取方法，包括如下步骤：⑴管状肠样本处理及清洗；⑵利用二硫苏糖醇溶液反复清洗肠道组织；⑶分离肠上皮细胞；⑷分离肠上皮细胞；⑸将分离液离心取上清进行初步过滤，去除细胞及细胞碎片；⑹获取向体内分泌的外泌体。本发明利用EDTA消化法高效地将肠上皮层及粘膜下层分离，再从分离液中用超速离心法获取肠道向体内分泌的外泌体。相对于常规组织酶消化获取外泌体的方法，此方法成本更低、获得的外泌体纯度更高。 | ||
| 搜索关键词： | 肠道 肠上皮细胞 分离液 内分泌 超速离心法 二硫苏糖醇 常规组织 肠道组织 初步过滤 反复清洗 细胞碎片 样本处理 酶消化 上皮层 粘膜 去除 下层 清洗 细胞 消化 | ||
【主权项】：
1.一种肠道外泌体提取方法，其特征在于包括如下步骤：⑴管状肠样本处理及清洗；⑵利用二硫苏糖醇溶液反复清洗肠道组织；⑶收集步骤②的洗涤液，经低温超速离心获取向体外分泌的外泌体；⑷分离肠上皮细胞：将步骤②中的肠管移至EDTA肠上皮分离液中，并放置于冰上孵育25‑40min促使上皮层脱落，再采用震荡至上清浑浊；⑸将分离液离心取上清进行初步过滤，去除细胞及细胞碎片；⑹将步骤⑤获取的过滤液，经低温超速离心获取向体内分泌的外泌体。
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