[发明专利]一种检测油乳剂全病毒灭活疫苗中有效抗原含量的方法在审
| 申请号： | 201910280795.9 | 申请日： | 2019-04-09 |
| 公开（公告）号： | CN109837329A | 公开（公告）日： | 2019-06-04 |
| 发明（设计）人： | 李雪峰;赵炳武;康斌;武玉梅;董鹏;王家福 | 申请（专利权）人： | 金河佑本生物制品有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人： | 赵晓琳 |
| 地址： | 010000 内蒙古自治区呼和浩特*** | 国省代码： | 内蒙古;15 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种检测油乳剂全病毒灭活疫苗中有效抗原含量的方法，涉及兽药技术领域。本发明所述方法包括以下步骤：(1)准备标准品；(2)疫苗用有机溶剂破乳分离水相；(3)提取标准品和疫苗水相中核酸；(4)实时荧光定量PCR检测；(5)根据检测的标准品Ct值及对应有效抗原含量建立标准曲线，将检测的疫苗Ct值代入标准曲线，计算疫苗水相中有效抗原含量，从而换算得到疫苗中有效抗原含量。本发明所述方法重复性和稳定性好，过程简单，操作性强，样品处理不需经过浓缩步骤，减少样品处理产生的误差，所需样品量少，周期短。 | ||
| 搜索关键词： | 有效抗原 标准品 标准曲线 灭活疫苗 样品处理 疫苗 全病毒 疫苗水 油乳剂 种检测 检测 实时荧光定量PCR 兽药技术领域 破乳分离 有机溶剂 样品量 核酸 换算 浓缩 | ||
【主权项】：
1.一种检测油乳剂全病毒灭活疫苗中有效抗原含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)以所述油乳剂全病毒灭活疫苗对应的病毒产品为原料制备标准品；(2)利用有机溶剂对所述油乳剂全病毒灭活疫苗进行破乳分离水相，得疫苗水相；所述油乳剂全病毒灭活疫苗的灭活剂包括：二乙烯亚胺、N‑乙酰乙烯亚胺、2‑乙基乙烯亚胺和β‑丙内酯；(3)分别提取步骤(1)所述标准品和步骤(2)所述疫苗水相的核酸，得到标准品核酸和疫苗水相核酸，分别以所述标准品核酸和疫苗水相核酸为模板，进行实时荧光定量PCR；(4)根据所述标准品核酸的Ct值和对应有效抗原含量建立标准曲线，将所述疫苗水相核酸的Ct值代入标准曲线，计算疫苗水相中有效抗原含量，从而得到疫苗中有效抗原含量；所述步骤(1)与步骤(2)不存在时间上的前后限制关系。
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