[发明专利]一种基因组DNA测序文库快速构建方法及配套试剂盒在审
| 申请号： | 201910284850.1 | 申请日： | 2019-04-10 |
| 公开（公告）号： | CN109853047A | 公开（公告）日： | 2019-06-07 |
| 发明（设计）人： | 秦雪梅;曹振;郑贤杰;胡淑敏;曹欣茹 | 申请（专利权）人： | 翌圣生物科技(上海)有限公司 |
| 主分类号： | C40B50/06 | 分类号： | C40B50/06 |
| 代理公司： | 上海精晟知识产权代理有限公司 31253 | 代理人： | 冯子玲 |
| 地址： | 200120 上海市浦*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基因组DNA测序文库快速构建方法及配套试剂盒。方法包括：一、选用DNase Ⅰ脱氧核糖核酸酶I作为DNA片段化酶，对样本DNA进行酶切法片段化，得到片段化DNA；二、对片段化DNA直接进行加dA尾，得到加dA尾的DNA；三、将加dA尾的DNA与接头连接，得到接头连接产物；四、对接头连接产物进行磁珠纯化；五、对接头连接产物进行PCR扩增，得到扩增产物；六、对扩增产物进行磁珠纯化，得到基因组DNA测序文库产物；七、对文库产物采用琼脂糖凝胶电泳检测法进行片段分布检查和文库评价。本发明的建库方法选用DNase Ⅰ作为DNA片段化酶，减少了末端修复和磷酸化步骤，使建库时间更短，成本更低。 | ||
| 搜索关键词： | 基因组DNA 测序文库 片段化DNA 磁珠纯化 接头连接 快速构建 扩增产物 连接产物 配套试剂 对接头 建库 文库 琼脂糖凝胶电泳检测 脱氧核糖核酸酶I 磷酸化步骤 末端修复 样本DNA 酶切法 片段化 检查 | ||
【主权项】：
1.一种基因组DNA测序文库快速构建方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、选用DNase Ⅰ即脱氧核糖核酸酶I作为DNA片段化酶，对样本DNA进行酶切法片段化，得到片段化DNA；步骤二、对步骤一得到的片段化DNA直接进行加dA尾，得到加dA尾的DNA；步骤三、将步骤二得到的加dA尾的DNA与接头进行连接，得到接头连接产物；步骤四、对接头连接产物进行磁珠纯化；步骤五、对接头连接产物进行PCR扩增，得到扩增产物；步骤六、对扩增产物进行磁珠纯化，得到基因组DNA测序文库产物；步骤七、对文库产物，采用琼脂糖凝胶电泳检测法，进行片段分布检查和文库评价。
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