[发明专利]一种小鼠Prg4原位杂交探针的制备方法在审
| 申请号： | 201910288188.7 | 申请日： | 2019-04-11 |
| 公开（公告）号： | CN110055309A | 公开（公告）日： | 2019-07-26 |
| 发明（设计）人： | 卞琴;刘书芬;董竞成 | 申请（专利权）人： | 复旦大学附属华山医院 |
| 主分类号： | C12Q1/6841 | 分类号： | C12Q1/6841;C12Q1/6806;C12Q1/6888 |
| 代理公司： | 上海中优律师事务所 31284 | 代理人： | 潘诗孟 |
| 地址： | 200040 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种小鼠Prg4原位杂交探针的制备方法。本发明的探针为小鼠Prg4variant序列探针，信号强、特异性强，可作为小鼠关节软骨表层和半月板表层的检测。本发明方法制得的探针可高选择性地标记小鼠关节软骨表层和半月板表层，为进一步研究Prg4基因的性质和关节软骨表层和半月板表层细胞亚群定位打下基础。 | ||
| 搜索关键词： | 探针 小鼠 关节软骨 半月板 原位杂交 制备 标记小鼠 表层细胞 特异性强 序列探针 信号强 亚群 基因 检测 研究 | ||
【主权项】：
1.一种小鼠Prg4原位杂交探针的制备方法，其特征是，包括如下步骤：①设计引物序列，包括正义链、反义链和探针长度；②在上述正义链和反义链两端分别加上限制性内切酶EcoRI和NotI序列；③扩增Prg4 DNA序列，并纯化，以1:5核苷酸浓度，连接质粒和Prg4；④克隆：将连接有Prg4的质粒与大肠杆菌混合培养；⑤序列检测，与Prg4序列比对，选择一致序列的DNA；⑥以反转录酶T7和SP6为引物，PCR法线性化Prg4 DNA；⑦通过SP6逆转录酶逆转录Prg4 DNA为Prg4反义RNA，同时标记地高辛；⑧纯化Prg4探针。
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