[发明专利]一种从神经干细胞来源的高浓度复合再生因子的制备方法及其用途

摘要

本发明提供一种从神经干细胞来源的高浓度复合再生因子的制备方法及其用途，人神经干细胞由人胚胎干细胞系诱导分化而成，选择第2‑3代处于对数生长期的人神经干细胞，收集干细胞培养基，进行高浓度的复合再生因子的制备。本发明人制备的神经干细胞来源的再生因子在治疗脊髓损伤中具有很好的应用前景，为有效治疗中枢神经系统损伤，包括创伤性脑损伤，脊髓损伤等提供新选择。

主权项

1.一种从神经干细胞来源的高浓度复合再生因子的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤A：将胚胎干细胞在10CM细菌培养皿中以无血清培养基悬浮培养7‑10天形成熟拟胚体，然后将成熟拟胚体打散、贴壁培养于一号Neurobasal培养基中，诱导其向神经干细胞定向分化，形成神经干细胞，然后将诱导而成的神经干细胞置于二号Neurobasal培养基中，选择处于2‑3代对数生长期的神经干细胞收集培养基；步骤B：吸出二号Neurobasal培养基，将神经干细胞置于DMEM/F12培养基中继续培养12小时，然后将细胞和培养基转移至离心管进行离心处理，收集离心管中的上清，备用；步骤C：将收集的上清分装到离心管，每管15mL，然后将各离心管冷冻干燥，离心管里形成固体粉末；步骤D：取每管冷冻干燥的粉末，采用1.5mL去离子水重新溶解，使用PD‑10预装脱盐柱进行脱盐纯化，得到高蛋白浓度的洗脱液；步骤E：重新收集洗脱液于离心管中，每管20mL，冷冻干燥成粉末，然后再用2mL去离子水重新溶解，得到高浓度的复合再生因子。