[发明专利]一种同时评价桃金娘根中抗氧化活性成分和含量的方法

摘要

本发明涉及一种利用DPPH‑UPLC对桃金娘根中有效成分没食子酸和鞣花酸的抗氧化性及其含量同时进行评价的方法，包括以下步骤：将与DPPH反应前和反应后的待测样品分别进行超高效液相色谱仪检测；根据UPLC检测得到的DPPH反应前和DPPH反应后供试品溶液的没食子酸和鞣花酸峰面积，计算没食子酸和鞣花酸含量及清除率。本发明能够同时检测桃金娘根中有效物质的抗氧化性及其含量；且操作简便、快速、试剂消耗少、灵敏度高，可用于评价桃金娘根药材中抗氧化活性成分及其含量，为桃金娘抗氧化活性成分的筛选和进一步开发提供理论依据。

主权项

1.一种利用DPPH‑UPLC同时对桃金娘根中有效成分没食子酸和鞣花酸的抗氧化性及其含量进行评价的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)桃金娘根鉴定；(2)标准溶液的制备：分别精密称取没食子酸对照品和鞣花酸对照品置于棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制成含没食子酸50～500μg/mL和鞣花酸50～500μg/mL的混合对照品溶液；临用时，分别用甲醇依次稀释上述标准溶液，配制成不同浓度的标准工作液；(3)供试品溶液的制备：将干燥桃金娘根打粉，过筛，得到待检测的桃金娘根药材样品粉末，置干燥器中储存；称取桃金娘根粉末置于具塞锥形瓶中，加入甲醇溶解后称定重量，在50～1500W、25～100kHz、25～60℃条件下超声提取10～90min，放冷，过滤，挥干，加入甲醇溶解残渣并定容；再分别吸取所得溶液置两个棕色容量瓶内，分别加入甲醇和DPPH溶液定容，摇匀，室温下避光反应10～60min，得到DPPH反应前和DPPH反应后供试品溶液；(4)超高效液相色谱检测，色谱条件如下：色谱柱：2.1mm×100mm、1.6μm Waters T3色谱柱；流动相：乙腈‑0.2％磷酸；梯度洗脱条件：6％乙腈0～2min，6％～16％乙腈2～3min，16％～20％乙腈3～8min，6％乙腈8～10min；检测波长：240～350nm；流速：0.1～0.5mL/min；柱温：25～50℃；进样体积0.5～10μL；(5)成分含量及其抗氧化作用评价：记录UPLC测定得到的DPPH反应前和DPPH反应后供试品溶液的没食子酸和鞣花酸峰面积，依据下式计算清除率：清除率＝1‑A/A₀；其中，A₀为DPPH反应前化合物峰面积，A为DPPH反应后化合物峰面积；评价桃金娘根中没食子酸和鞣花酸的含量和抗氧化能力。