[发明专利]一种胎盘间充质干细胞快速分离与培养至收获冻存的方法

摘要

本发明公开了一种胎盘间充质干细胞快速分离与培养至收获冻存的方法，包括步骤一，组织分离；步骤二，组织块制备；步骤三，接种铺瓶；步骤四，原代细胞观察与换液；步骤五，原代细胞传代；步骤六，细胞冻存；该方法，步骤简单易操作，成本低，效率高；增加了干铺这个步骤，能够有效的缩短胎盘间充质干细胞爬出时间，缩短到达收获的时间，进一步缩短了生产周期；通过剥取胎盘特定部位的组织块，大大降低了杂细胞数量，能够得到单一的成纤维间充质干细胞，保证免疫表型的占比；传代和冻存步骤的优化提高了胎盘间充质干细胞的原始性和活率，在简化操作步骤和优化实验条件下使得胎盘间充质干细胞爬出速度加快，大量减少了人力、物力、财力。

主权项

1.一种胎盘间充质干细胞快速分离与培养至收获冻存的方法，包括步骤一，组织分离；步骤二，组织块制备；步骤三，接种铺瓶；步骤四，原代细胞观察与换液；步骤五，原代细胞传代；步骤六，细胞冻存；其特征在于：其中在上述步骤一中，组织分离包括以下步骤：1）取出胎盘，75%酒精浸泡，再用盐水清洗3遍；2）取部分绒毛膜组织清洗，放入50mL离心管内；其中在上述步骤二中，将组织块清净，用无菌医用手术剪将组织块机械剪碎成匀浆；其中在上述步骤三中，接种铺瓶包括以下步骤：1）用细胞刮刀将组织块匀浆铺在培养瓶内；2）放入二氧化碳培养箱进行干燥培养；3）再加入培养基，放置二氧化碳培养箱中培养；其中在上述步骤四中，铺瓶后绝对静置七天，第八天在显微镜下观察，根据细胞生长状态对培养瓶内培养基进行换液处理；其中在上述步骤五中，显微镜下观察，达到传代融合度时，进行传代；其中在上述步骤六中，显微镜下观察，达到收获融合度时，进行冻存。