[发明专利]一种轴向超分辨的双光子荧光显微装置及方法

摘要

本发明公开了一种轴向超分辨的双光子荧光显微装置及方法，属于激光点扫描显微领域，实现了对样品的双光子轴向超分辨成像。通过飞秒激光器发出超短脉冲激光，以实现荧光样品的双光子激发；通过空间光调制器对激发光进行相位调制，依次用轴向实心光斑和轴向空心光斑扫描样品，对得到的两幅扫描双光子图像进行权重差分最终得到轴向超分辨图像。相对于其他双光子轴向超分辨成像显微镜，该装置其结构简单，成像深度大，为生命科学和纳米技术提供了良好的研究手段。

主权项

1.一种轴向超分辨的双光子荧光显微装置，包括激发光路和探测光路，其特征在于，所述激发光路上沿光路依次布置有：飞秒激光器，用于发出超短脉冲激光对荧光样品进行双光子激发；第一半波片，用于调节设于所述飞秒激光器之后的光参量振荡器出射光的s光和p光的比例；偏振分束器，与所述第一半波片配合，调节光路中的光强；起偏器，使p偏振光入射到空间光调制器；空间光调制器，用于将光斑调制成轴向空心光斑；第二半波片，用于将线偏振光转换为圆偏振光，其后设有扫描系统和二色镜，激发光透过所述二色镜进入显微物镜，照明荧光样品，所述荧光样品产生的荧光经二色镜后反射进入所述探测光路；所述探测光路上设有用于聚焦荧光的场镜和将探测到的光信号转换成为电信号并传至计算机的探测器；所述计算机用于处理探测器传送过来的电信号，并控制振镜系统对样品进行x和y方向上的扫描以及控制显微物镜轴向移动进行z方向上的扫描。