[发明专利]一种对地贫患者的造血干细胞进行基因修正的方法在审
| 申请号： | 201910308856.8 | 申请日： | 2019-04-17 |
| 公开（公告）号： | CN109971791A | 公开（公告）日： | 2019-07-05 |
| 发明（设计）人： | 陈相波;应荣;田朋飞;雷鸣 | 申请（专利权）人： | 杭州荣泽基因科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;C12N15/85;C12N15/12 |
| 代理公司： | 杭州裕阳联合专利代理有限公司 33289 | 代理人： | 金方玮 |
| 地址： | 311200 浙江省杭州市萧山区大江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种对地贫患者的造血干细胞进行基因修正的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一，在HBB基因‑28(A/G)位点附近选择CRISPR靶点，设计gRNA序列；步骤二，构建一个模版质粒，在HBB基因CRISPR靶点上下游两段500bp序列之间插入piggyBac的双ITRs序列；步骤三，用转染试剂、模版质粒、gRNA和Cas9载体共同转染地贫患者造血干细胞，再对细胞培养基进行嘌呤霉素筛选；步骤四，对抗性基因进行鉴定和验证；本发明将CRISPR/Cas9系统和piggyBac联合使用，可以有效地转染地贫患者的造血干细胞，提高同源重组的效率，有效地对地贫患者的‑28(A/G)突变位点进行修正。 | ||
| 搜索关键词： | 造血干细胞 基因 修正 靶点 模版 质粒 转染 细胞培养基 同源重组 突变位点 转染试剂 嘌呤霉素 有效地 构建 两段 位点 筛选 验证 | ||
【主权项】：
1.一种对地贫患者的造血干细胞进行基因修正的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一，在HBB基因‑28(A/G)位点附近选择CRISPR靶点，设计gRNA序列；步骤二，构建一个模版质粒，在HBB基因CRISPR靶点上下游两段500bp序列之间插入piggyBac的双ITRs序列；步骤三，用转染试剂、模版质粒、gRNA和Cas9载体共同转染地贫患者造血干细胞，再对细胞培养基进行嘌呤霉素筛选；步骤四，对抗性基因进行鉴定和验证。
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