[发明专利]一种改良大鼠杂交瘤细胞制备的方法

摘要

本发明公开了一种改良大鼠杂交瘤细胞制备的方法，将细胞因子IL6稳定整合到大鼠骨髓瘤细胞IR983F中，制备出IR983F‑IL6细胞，IR983F‑IL6细胞自身可稳定分泌IL6，细胞活力及单个细胞生存能力远高于IR983F，当制备大鼠杂交瘤细胞后，杂交瘤细胞同样拥有IR983F‑IL6的特性，使得在没有饲养细胞的时候，可以轻松获得大鼠杂交瘤细胞；采用重组表达载体免疫动物大鼠；将大鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合；筛选获得产生目的蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株；该方法可提高杂交瘤细胞活力及存活率，易于大鼠杂交瘤大规模培养制备，在单克隆抗体等蛋白质类生物材料的应用方面，可降低成本和实现规模化生产。

主权项

1.一种改良大鼠杂交瘤细胞制备的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤S1、合成大鼠IL6基因序列，并将其克隆至慢病毒载体pHIV‑neo中，构建出一种pHIV‑neo‑IL6的骨架质粒；步骤S2、扩增并用无内毒素质粒提取法来提取慢病毒骨架质粒pHIV‑neo‑IL6和辅助质粒pMD2G、pSPAX2；步骤S3、采用多质粒共转染法将3种质粒转染至293T细胞中，48h后收取细胞上清，并从细胞上清中纯化出包装有IL6基因的慢病毒；步骤S4、用提纯后的慢病毒，感染IR983F细胞，24h后添加G418筛选试剂，之后每48h更换一次含有G418的培养基，两周后含有IL6基因的IR983F细胞存活下来，并形成细胞克隆团；步骤S5、小心吸取细胞克隆团，并分别转移至24孔板中继续培养，一周后，将细胞活力最强，对G418耐受的细胞进行扩大培养，冻存细胞并命名为IR983F‑IL6；步骤S6、对免疫后的大鼠脾细胞与IR983F‑IL6细胞进行预处理，预处理结束对后对免疫后的大鼠脾细胞与IR983F‑IL6细胞进行融合，经培养、筛选、亚克隆，制备出稳定的杂交瘤细胞。