[发明专利]一种可扩展的合成寡核苷酸肽缀合物的操作方法

摘要

本发明公开一种合成寡核苷酸肽缀合物的方法，其包括以下步骤：a、制备叠氮基寡核苷酸和DBCO‑肽并高度纯化；b、反应准备：将DBCO‑肽溶解在DMSO中得到DBCO‑肽溶液，将叠氮基寡核苷酸溶于水或水与DMSO的混合液中得到叠氮基寡核苷酸溶液；c、偶联反应：先对叠氮基寡核苷酸进行高效液相色谱分析，再确定缀合物峰的位置，对反应产物提取样品并进行高效液相色谱分析，确定偶联反应之后反应产物的峰的位置，未反应的叠氮基寡核苷酸的峰的面积，之后进行逐步叠加反应。本发明适合大规模生产、无需进一步纯化、成本低、避免产物降解。

主权项

1.一种可扩展的合成寡核苷酸肽缀合物的操作方法，其特征在于，包括以下步骤：制备叠氮基寡核苷酸和DBCO‑肽并高度纯化；反应准备：将DBCO‑肽溶解在DMSO中得到DBCO‑肽溶液，将叠氮基寡核苷酸溶于水或水与DMSO的混合液中得到叠氮基寡核苷酸溶液；偶联反应：（c1）、对叠氮基寡核苷酸进行高效液相色谱分析，其起始峰的面积为A₀，取DBCO‑肽溶液的量为V₀添加到叠氮基寡核苷酸溶液中反应得到反应产物，其中DBCO‑肽与叠氮基寡核苷酸的摩尔比为1:1.00‑1.25；（c2）、确定缀合物峰的位置：对反应产物提取样品并进行高效液相色谱分析，确定偶联反应之后反应产物的峰的位置，未反应的叠氮基寡核苷酸的峰的面积为A₁；（c3）、逐步叠加反应：（1）第一次叠加反应：往反应产物中添加DBCO‑肽溶液的量为V₁，；（2）第二次叠加反应：继续添加DBCO‑肽溶液的量为V₂，；（3）第n次叠加反应：继续添加DBCO‑肽溶液的量为V_n，，其中，每次叠加反应后，对产物提取样品并进行高效液相色谱分析，得到未反应的叠氮基寡核苷酸的峰的面积A_n+1，直至A_n+1不再减小，结束叠加反应得到最终产物。