[发明专利]一种降低卫矛种子内生菌污染率、快速诱导胚状体的方法

摘要

本发明涉及中药材种植技术领域，特别涉及一种降低卫矛种子内生菌污染率、快速诱导胚状体的方法。该方法具体包括如下步骤：（1）卫矛种子外植体的采集；（2）种子前处理；（3）种子消毒；（4）种子萌发诱导；（5）胚状体诱导。采用本发明方法，不仅能有效抑制卫矛种子内生菌的生长，而且能显著提高卫矛种子萌发率和胚状体诱导率。具体表现为：卫矛种子内生菌污染率降低至8%以下，种子萌发率从不足10%提高到90%以上，胚状体诱导率达88%以上，对于实现卫矛的规模化种子繁殖和组织培养的开展具有重要意义。

主权项

1.一种降低卫矛种子内生菌污染率、快速诱导胚状体的方法，其特征在于如下主要步骤：1）卫矛种子外植体的采集，于8月下旬～10月下旬，待卫矛种子成熟后，于晴天的上午采集种子；2）种子前处理，剥去卫矛种子外面的果皮和假种皮，放入洁净的烧杯中，用流水冲洗干净，放入150～200 mg/L的赤霉素GA₃溶液中浸泡28～36 h；3）种子消毒，将经过前处理的种子用流水清洗10 min左右，然后放入洗洁精水中浸泡30~45 min左右，再用流水冲洗干净，冲洗后的种子于超净工作台上，先用75%酒精浸泡60～75 s，用无菌水漂洗3次，后用0.1%升汞浸泡10～12 min，无菌水漂洗4次，每次1.5 min，然后将消毒后的种子放入事先准备好的无菌培养皿中，用无菌滤纸吸干种子上残留的水分，接种前用无菌不锈钢刀片沿种子背脊线处切开，露出胚乳即可；4）种子萌发诱导：将切好的种子接种到卫矛种子萌发诱导培养基中，接种时外植体横放，并轻压种子使其与培养基充分接触；培养室温度24～26℃，湿度70～80%，光照强度1800～2000 lx，每天光照时间10～12 h，30天后可见米白色芽点愈伤组织或鲜绿色芽点从切口处长出，10天后即可转入胚状体诱导培养基中培养；5）胚状体诱导：将萌发诱导培养基中已萌发的、长势良好的种子转入胚状体诱导培养基中诱导胚状体，转接时用镊子轻压种子使愈伤组织或芽点与培养基充分接触，培养室温度24～26℃，湿度70～80%，光照强度1800～2000 lx，每天光照时间10～12 h，培养30 d后，可见胚状体长出。