[发明专利]基于杂交、延伸连接反应的核酸捕获文库制备方法在审
| 申请号： | 201910318823.1 | 申请日： | 2019-04-19 |
| 公开（公告）号： | CN110241177A | 公开（公告）日： | 2019-09-17 |
| 发明（设计）人： | 马晓玲;刘冬梅 | 申请（专利权）人： | 上海三誉华夏基因科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C12N15/10;C40B50/06 |
| 代理公司： | 苏州市中南伟业知识产权代理事务所(普通合伙) 32257 | 代理人： | 郭磊 |
| 地址： | 202162 上海市崇明区陈家镇瀛东村*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了基于杂交、延伸连接反应的核酸捕获文库制备方法，属于核酸检测技术领域。本发明通过设计捕获探针引物，然后与基因组DNA进行杂交反应，得到目的DNA片段后进行延伸、连接反应，后对目的DNA片段进行PCR扩增，纯化后即可进行文库测序。本发明的靶向区域捕获建库方法比较灵活，特异性高，捕获效率高，操作简单，耗时较短，并且能够尽量减少因PCR扩增效率差异造成的捕获区域均一性很差的现象。 | ||
| 搜索关键词： | 连接反应 文库 核酸捕获 制备 捕获 延伸 杂交 核酸检测技术 基因组DNA 靶向区域 捕获区域 捕获探针 效率差异 杂交反应 均一性 测序 建库 引物 耗时 灵活 | ||
【主权项】：
1.一种基于杂交、延伸连接反应的核酸靶向捕获测序文库制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)针对1～20位需要捕获的位点进行捕获探针引物设计，使目的区域延伸长度在150bp‑200bp之间；(2)将基因组DNA加热变性后，与步骤(1)设计的捕获探针引物、杂交液进行杂交，捕获探针引物与基因组DNA上的目的区域进行结合；(3)加入延伸反应试剂，对步骤(2)捕获成功的DNA片段进行碱基延伸反应；(4)添加连接反应试剂进行连接反应，连接步骤(3)延伸反应后DNA片段的缺口；(5)添加只对单链DNA片段作用的核酸酶，消化多余的脱氧核糖核苷三磷酸和杂交引物；(6)采用PCR反应扩增捕获成功的DNA片段，并加上测序所需的接头序列；(7)纯化后进行测序。
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