[发明专利]基于Sanger测序法对Pax1基因启动子区甲基化多位点的检测方法在审
| 申请号： | 201910333862.9 | 申请日： | 2019-04-24 |
| 公开（公告）号： | CN110106243A | 公开（公告）日： | 2019-08-09 |
| 发明（设计）人： | 林东旭;刘小龙;魏国鹏 | 申请（专利权）人： | 南京格致医学检验有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6869 | 分类号： | C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 北京中企鸿阳知识产权代理事务所(普通合伙) 11487 | 代理人： | 汪斌 |
| 地址： | 212028 江苏省南京市高新技术*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种基于Sanger测序法对Pax1基因启动子区甲基化多位点的检测方法，本发明设计的pax1基因启动子区扩增引物分为两对，一对是甲基化扩增引物，一对是非甲基化扩增引物，扩增片段大小在150bp左右，片段包含了9个甲基化位点，扩增后配合ABI3720xl测序平台进行Sanger测序。本发明提供的方法能够一次测序可以拿到PAX1启动子区9个位点的甲基化情况结果，而现有Pax1探针法专利大多只检测一个位点，提供信息有限；Sanger测序的周期很短，比二代测序短5‑7天，和qPCR探针法相当；PCR加Sanger测序实验操作容易，测序结果判读直接一目了然，不需要数据分析经验。 | ||
| 搜索关键词： | 甲基化 启动子区 扩增引物 测序 探针法 多位 检测 甲基化位点 测序平台 结果判读 扩增片段 情况结果 实验操作 数据分析 个位 扩增 位点 配合 | ||
【主权项】：
1.一种基于Sanger测序法对Pax1基因启动子区甲基化多位点的检测方法，按照先后顺序包括以下步骤：(1)将临床宫颈脱落细胞样本进行DNA提取，对提取的DNA进行浓度测定；(2)提取后的DNA进行重硫酸盐转化，反应后体系经过清洗纯化去重硫酸盐最后得到纯净的转化产物，直接用于下一步扩增；(3)将Multiplex PCR master mix、正向引物、反向引物、转化产物和无核酸水组成PCR体系进行PCR扩增；(4)将PCR产物纯化后进行测序。
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