[发明专利]一种在H11位点条件性过表达Yap1基因小鼠模型的构建方法在审
| 申请号： | 201910338790.7 | 申请日： | 2019-04-25 |
| 公开（公告）号： | CN110093369A | 公开（公告）日： | 2019-08-06 |
| 发明（设计）人： | 史培良;高翔;王宏宇 | 申请（专利权）人： | 成都药康生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;A01K67/027 |
| 代理公司： | 成都正华专利代理事务所(普通合伙) 51229 | 代理人： | 李蕊;李林合 |
| 地址： | 610000 四川省成都市温江区成都海峡两岸科技*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种在H11位点条件性过表达Yap1基因小鼠模型的构建方法，构建方法为：先获得可诱导型Yap1过表达转基因载体；再获得转基因F0代小鼠；然后F0代小鼠与野生型小鼠交配，传代建系，获得F1代小鼠，阳性F1代小鼠扩繁后进行互配，即得条件性过表达小鼠Yap1动物模型。本发明构建得到的转基因小鼠模型可研究Yap1在不同组织、不同发育时期的功能及Hippo信号通路的作用机制，并可以研究Hippo信号通路在动物发育、生物肿瘤发生及再生医学等多学科中的作用，对生物体信号传导研究有着重要的指导意义。 | ||
| 搜索关键词： | 小鼠 构建 条件性 小鼠模型 信号通路 位点 转基因小鼠模型 传代 生物体信号 野生型小鼠 转基因载体 动物模型 发育时期 再生医学 肿瘤发生 作用机制 诱导型 转基因 交配 扩繁 传导 研究 发育 学科 | ||
【主权项】：
1.一种在H11位点条件性过表达Yap1基因小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：根据Yap1基因的序列，设计合成sgRNA序列；S2：以puc57‑sgRNA质粒为模板，PCR扩增获得sgRNA转录模板，并经过体外转录得到sgRNA；将得到的sgRNA与Cas9蛋白共同孵育，得Cas9/sgRNA混合物；S3：根据S2得到的sgRNA设计、构建携带条件性过表达Yap1序列的线性化的条件性过表达Yap1打靶载体；所述打靶载体利用同源重组技术构建，构建过程中所用到的重组系统为Cre‑LoxP和Dre‑rox双重诱导表达系统，打靶载体包括CAG‑loxP‑rox‑Stop‑loxp‑rox‑mYap1‑P2A‑mCherry基因片段；S4：将S3得到的打靶载体与Cas9/sgRNA混合物混合后，转移至0.5天的小鼠受精卵中，再将受精卵转移至0.5天的假孕雌鼠体内，出生的小鼠即为F0代小鼠；S5：将S4得到的F0代小鼠与野生型C57BL/6J小鼠配繁获得F1代小鼠，阳性F1代小鼠扩繁后进行互配，获得条件性过表达小鼠Yap1动物模型。
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