[发明专利]一种家蚕表达重组蓖麻毒素蛋白A链的方法在审
| 申请号： | 201910345204.1 | 申请日： | 2019-04-26 |
| 公开（公告）号： | CN110129332A | 公开（公告）日： | 2019-08-16 |
| 发明（设计）人： | 吴小锋;张健家;沈运旺 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N15/29 | 分类号： | C12N15/29;C12N15/866;C07K14/415;C07K1/22 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 林超 |
| 地址： | 310058 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种家蚕表达重组蓖麻毒素蛋白A链的方法。以蓖麻籽抽提获得的总RNA为模板PCR处理获得蓖麻毒素蛋白A链基因的PCR产物；利用家蚕核型多角体病毒BmNPV作为载体，构建了含有蓖麻毒素蛋白A链基因的重组病毒，利用家蚕作为重组杆状病毒的宿主表达具有生物活性的重组蓖麻毒素蛋白A链。本发明以家蚕作为宿主生产重组蓖麻毒素蛋白A链，具有较强的生物活性，有利于蛋白质的快速提取，为该蛋白A链在医学和治疗领域上的应用提供了新的途径。 | ||
| 搜索关键词： | 蓖麻毒素蛋白A链 家蚕表达 生物活性 家蚕 家蚕核型多角体病毒BmNPV 重组杆状病毒 宿主 总RNA为模板 快速提取 生产重组 宿主表达 应用提供 重组病毒 蓖麻籽 基因 蛋白A 抽提 构建 蛋白质 医学 治疗 | ||
【主权项】：
1.一种家蚕表达重组蓖麻毒素蛋白A链的方法，其特征在于：(1)蓖麻毒素蛋白A链编码基因的克隆：以蓖麻籽抽提获得的总RNA为模板，利用RT‑PCR系统一步克隆获得蓖麻毒素蛋白A链基因的PCR产物；(2)含有蓖麻毒素蛋白A链基因的重组杆状病毒的构建：用限制性内切酶BamHI和HindIII消化PCR2.1‑蓖麻毒素蛋白A链得到蓖麻毒素蛋白A链基因片段，然后将蓖麻毒素蛋白A链基因片段克隆入杆状病毒转移载体pBlueBacHisA获得重组体pBlueBacHisA‑蓖麻毒素蛋白A链；通过共转染在家蚕培养细胞BmN内将重组体pBlueBacHisA‑蓖麻毒素蛋白A链与家蚕核型多角体病毒(BmNPV)的基因同源重组产生重组病毒；(3)家蚕体内表达重组蓖麻毒素蛋白A链：使用家蚕幼虫5龄起蚕，经口接种上述重组病毒进行感染表达，将涂布有病毒液的桑叶饲喂家蚕，然后在23‑25℃下饲养；在饲养96小时后收集家蚕幼虫；从家蚕幼虫中收集血淋巴，用Ni‑NTA亲和柱在非变性条件下进行蛋白纯化，获得最终的重组蓖麻毒素蛋白A链蛋白。
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