[发明专利]一种无毒性破伤风毒素和产气荚膜梭菌β毒素重组融合蛋白

摘要

本发明涉及一种无毒性破伤风毒素和产气荚膜梭菌β毒素重组融合蛋白。本发明系采用经过密码子优化、破伤风梭菌毒素C片段与含有多个氨基酸突变的产气荚膜梭菌β毒素突变体的重组融合蛋白，即最大限度地保留两种毒素蛋白的免疫原性，又避免了单个氨基酸突变带来的生物安全隐患。该重组融合蛋白可用来制备破伤风梭菌、B型产气荚膜梭菌和C型产气荚膜梭菌的单位疫苗，与我国目前商品化的梭菌类天然毒素灭活疫苗相比，具有制备工艺简单、免疫剂量低、疫苗效力优良等优点，并大大降低了疫苗生产过程中的生物安全风险，是上述三种梭菌毒素疫苗升级换代的理想候选疫苗抗原；而且在与其它抗原共同制备联苗时，无需增大联苗的使用剂量，即可制备联苗。

主权项

1.一种无毒性破伤风毒素和产气荚膜梭菌β毒素重组融合蛋白，其特征在于所述表达的破伤风毒素和产气荚膜梭菌β毒素重组融合蛋白(rTTc‑CPB_m4)与成熟的野生型破伤风毒素相比，只含有无毒的C片段；与成熟的野生型产气荚膜梭菌β毒素相比，包含多个氨基酸的突变，优选的为以下4个氨基酸突变：第212位精氨酸突变为谷氨酸，第268位的亮氨酸突变为甘氨酸，266位的酪氨酸和278位的色氨酸突变为丙氨酸；在rTTc‑CPB_m4的C端含有便于蛋白纯化的标签；所述重组融合蛋白是由重组表达rTTc‑CPB_m4的宿主细胞大肠杆菌(Escherichia coli)的BL21(DE3)细胞株作为生产菌株制备的，该菌株被命名为大肠埃希氏菌BL/TB株，并已于2019年01月11日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号：CGMCC No.17162。