[发明专利]基于线性片段同源重组进行须糖多孢菌基因簇阻断的方法有效
| 申请号： | 201910359121.8 | 申请日： | 2019-04-30 |
| 公开（公告）号： | CN110129355B | 公开（公告）日： | 2023-05-12 |
| 发明（设计）人： | 夏立秋;穰杰;何昊城;丁学知;孙运军 | 申请（专利权）人： | 湖南师范大学 |
| 主分类号： | C12N15/80 | 分类号： | C12N15/80;C12N15/90;C12N1/15;C12R1/645 |
| 代理公司： | 长沙星耀专利事务所(普通合伙) 43205 | 代理人： | 宁星耀;宁冈 |
| 地址： | 410006 湖*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | 基于线性片段同源重组进行须糖多孢菌基因簇阻断的方法，包括以下步骤：（1）在须糖多孢菌基因组中找到ura4作为负筛选标记基因；（2）在ura4基因的两端设计分别设计一段大小为1 kb的序列用于进行ura4基因替换的同源臂；（3）采用融合PCR将ura4基因上、下游同源臂与阿泊拉抗性基因进行融合，并与质粒pOJ260进行连接，获得重组质粒pOJ260‑ura4；（4）将含有重组质粒pOJ260‑ura4的原生质体转入须糖多孢菌中，进行ura4基因的敲除，获得ura4缺失菌株S.pogona‑Δura4，通过线性片段同源重组技术对所述ura4缺失菌株S.pogona‑Δura4进行须糖多孢菌基因簇的阻断。本发明无需构建载体、引入外源重组酶，可在短时间内获得具有靶标基因簇阻断的阳性单克隆，提高须糖多孢菌非靶标基因簇阻断的效率。 | ||
| 搜索关键词： | 基于 线性 片段 同源 重组 进行 须糖多孢菌 基因 阻断 方法 | ||
【主权项】：
1.一种基于线性片段同源重组进行须糖多孢菌基因簇阻断的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）在须糖多孢菌基因组中找到ura4作为负筛选标记基因；（2）在ura4基因的两端设计分别设计一段大小为1 kb的序列用于进行ura4基因替换的同源臂；（3）采用融合PCR将ura4基因上、下游同源臂与阿泊拉抗性基因进行融合，并与质粒pOJ260进行连接，获得重组质粒pOJ260‑ura4；（4）将含有重组质粒pOJ260‑ura4的原生质体转入须糖多孢菌中，进行ura4基因的敲除，获得ura4缺失菌株S.pogona‑Δura4，通过线性片段同源重组技术对所述ura4缺失菌株S.pogona‑Δura4进行须糖多孢菌基因簇的阻断。
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