[发明专利]一种CRISPR/Cas9基因编辑系统及其应用

摘要

本发明公开了一种CRISPR/Cas9基因编辑系统及其应用，属于基因工程技术领域以及生物工程技术领域。此系统可达到对新金色分枝杆菌进行基因编辑的目的；此系统使用的pML‑Cas9质粒和pJM‑sgRNA质粒就能够在新金色分枝杆菌中稳定存在、表达，不会随着新金色分枝杆菌的传代丢失，也不会被新金色分枝杆菌自身所存在的保护机制排斥；利用此系统的CRISPR/Cas9基因编辑系统系统对新金色分枝杆菌进行基因编辑，敲除效率较高，可达50％。

主权项

1.一种CRISPR/Cas9基因编辑系统，其特征在于，所述CRISPR/Cas9基因编辑系统包含pML‑Cas9质粒以及pJM‑sgRNA质粒；所述pML‑Cas9质粒包含pMV261表达载体、Cas9基因、Pj23119启动子以及NHEJ修复基因；所述pMV261表达载体上的Hsp60启动子被替换为了Tac启动子；所述NHEJ修复基因包含编码DNA末端结合蛋白mku的基因以及编码DNA连接酶LigD的基因；所述Cas9基因位于pMV261表达载体的Tac启动子的下游以及pMV261表达载体的rrnB终止子上游，由Tac启动子驱动表达；所述Pj23119启动子位于pMV261表达载体的KanR抗性基因的下游；所述NHEJ修复基因位于Pj23119启动子的下游以及pMV261表达载体的复制起点(ori)的上游，由Pj23119启动子驱动表达；所述pJM‑sgRNA质粒依次包含OriM复制子、pMB1复制子、Pj23119启动子、sgRNA序列、rrnB终止子以及aadA抗性基因，命名为pJM‑sgRNA质粒；所述sgRNA序列是靶向序列，可特异性靶向靶序列；所述靶序列是指需编辑基因的核苷酸序列。