[发明专利]利用二乙酰胺四乙酸钠对骨骼或牙齿进行DNA提取的方法在审
| 申请号： | 201910363956.0 | 申请日： | 2019-04-30 |
| 公开（公告）号： | CN110004143A | 公开（公告）日： | 2019-07-12 |
| 发明（设计）人： | 张丹;李志业;伊鹏;郭科建;宣树卿;康成良;林改革 | 申请（专利权）人： | 山东森芃生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京和信华成知识产权代理事务所(普通合伙) 11390 | 代理人： | 胡剑辉 |
| 地址： | 264333 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种利用二乙酰胺四乙酸钠对骨骼或牙齿进行DNA提取的方法，利用裂解液中的二乙酰胺四乙酸钠成分对骨骼或牙齿中的钙质成分的螯合作用，对骨骼或牙齿进行脱钙，然后利用裂解液中的表面活性剂及蛋白酶K成分对骨骼或牙齿中的细胞膜及蛋白质进行裂解消化，释放DNA成分，最后经过一系列的分离、漂洗、洗脱步骤，提取得到DNA；裂解液中的乙二酰胺四乙酸钠成分对骨骼或牙齿中的钙成分具有更强的螯合作用，能更加高效快速地对骨骼或牙齿进行脱钙，提高了DNA提取得率的同时还缩短了提取时间。 | ||
| 搜索关键词： | 骨骼 牙齿 四乙酸 二乙酰胺 裂解液 螯合作用 脱钙 细胞膜 表面活性剂 高效快速 蛋白酶K 二酰胺 漂洗 钙质 裂解 洗脱 蛋白质 消化 释放 | ||
【主权项】：
1.利用二乙酰胺四乙酸钠对骨骼或牙齿进行DNA提取的方法，其特征在于：包含以下操作步骤：(1)将300mg骨骼粉末或牙齿粉末放入离心管中，往其中加入500ul裂解液，于50‑60℃条件下加热裂解1‑12小时；(2)将步骤(1)中的离心管置于离心机中，以12000转每分钟的速度离心1‑5分钟，将上清液转移至新的离心管中，加入750ul结合液并混合均匀；(3)将步骤(2)新的离心管中的混合液转移至离心柱中，将离心柱置于离心机中，以12000转每分钟的速度离心0.5‑2分钟；(4)倒弃步骤(3)离心柱收集管中的液体，将离心柱放回离心柱收集管内，往离心柱中加入700ul漂洗液，于离心机中12000转每分离心0.5‑2分钟；(5)倒弃步骤(4)离心柱收集管中的液体，将离心柱放回离心柱收集管内，于离心机中12000转每分离心2‑5分钟；(6)将步骤(5)离心柱放入新的离心管内，往离心柱底部的硅胶膜中加入10‑200ul洗脱液，静置3‑10分钟，于离心机中以12000转每分钟的速度离心0.5‑2分钟，丢弃离心柱，离心管内液体即为DNA溶液。
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