[发明专利]一种高质量水稻核糖体印记文库的构建方法

摘要

本发明主要涉及一种高质量水稻核糖体印记文库的构建方法，通过改良的核糖体提取液分离高质量核糖体/RNA复合物，经过核酸酶处理、SDS法抽提印记RNA、纯化印记RNA、去除核糖体印记RNA中的rRNA、末端修复、加3′端接头序列、反转录、环化并PCR富集文库等步骤，最终获得印记片段长度集中、具有显著3碱基周期性的高质量水稻核糖体印记文库，且该构建流程具有较强的普适性。通过本发明构建的水稻核糖体印记文库，印记片段长度较为集中且峰值大多在理想长度28碱基，少数位于27或29碱基位置，但均具有显著的3碱基周期性，且文库质量稳定，不受材料及生长条件差异影响。本发明对于推动水稻翻译组学相关研究具有重要意义。

主权项

1.一种改良的核糖体提取液配方，其特征在于，包括如下组分：0.05～0.15M的三羟甲基氨基甲烷‑盐酸(Tris‑HCl，pH8.0)；30～50mM的氯化钾(KCl)；10～30mM的氯化镁(MgCl₂)；1.5～2.5％(V/V)的聚氧乙烯(10)十三烷基醚(polyoxyethylene(10)tridecyl ether)；0.1～0.3％(W/V)的脱氧胆酸(deoxycholic acid)；0.5～1.5mM的二硫苏糖醇(DL‑Dithiothreitol，DTT)；50～100μg/mL的放线菌酮(cycloheximide)；以及5～15U/mL的脱氧核糖核酸酶I(DNaseI)。