[发明专利]一种多重PCR方法

摘要

本发明公开了一种多重PCR方法。本发明公开的多重PCR方法包括：利用满足如下条件的成套引物进行PCR扩增：每个引物对的因素J小于50％，且9个因素中至多一个因素不在标准范围内；9个因素为因素A、B、C、D、E、F、G、H和I；标准范围如下：35％≤因素A≤60％；68℃≤因素B≤79℃；30％≤因素C≤70％；30％≤因素D≤70％；15kcal/mol≤因素E的绝对值≤70kcal/mol；因素F的绝对值＜100kcal/mol；因素G的绝对值＜100kcal/mol；4kcal/mol≤因素H的绝对值≤10kcal/mol；因素I＜100℃。实验证明，本发明的方法可用于多重PCR。

主权项

1.多重PCR方法，包括：利用成套引物进行PCR扩增，实现多重PCR；所述成套引物满足如下a1)、a2)和a3)：a1)所述成套引物由n个引物对组成，n为大于等于2的自然数；a2)所述成套引物中的每个引物对的因素J小于50％，所述因素J为引物对的反向引物与所述成套引物的其它引物形成引物二聚体的个数占所述成套引物中引物个数的百分比；a3)所述成套引物中的每个引物对的9个因素中至多一个因素不在标准范围内；所述9个因素为因素A、B、C、D、E、F、G、H和I；所述因素A为引物对的反向引物的GC含量；所述因素B为引物对的反向引物的TM值，所述因素C为目标片段的GC含量；所述因素D为从目标片段上游400bp处至该目标片段下游400bp处间的DNA片段的GC含量；所述因素E为目标片段的结构自由能；所述因素F为目标片段及目标片段下游150bp的连续DNA片段的结构自由能；所述因素G为目标片段及目标片段上游150bp的连续DNA片段的结构自由能；所述因素H为引物对的正向引物3’末端5个核苷酸的结构自由能；所述因素I为引物对的反向引物与所述成套引物的其它引物中部连续大于等于5个核苷酸所形成的多个双链DNA的TM值总和；所述9个因素的标准范围如下：35％≤所述因素A≤60％；68℃≤所述因素B≤79℃；30％≤所述因素C≤70％；30％≤所述因素D≤70％；15kcal/mol≤所述因素E的绝对值≤70kcal/mol；所述因素F的绝对值＜100kcal/mol；所述因素G的绝对值＜100kcal/mol；4kcal/mol≤所述因素H的绝对值≤10kcal/mol；所述因素I＜100℃。