[发明专利]一种基于茎环爪探针的双链DNA检测方法及生物传感器

摘要

本发明公开了一种基于茎环爪探针的双链DNA检测方法，属于生物检测技术领域。所述检测方法包括：根据目标单链DNA和互补单链DNA分别设计发夹探针H1、H2和茎环爪探针SLCP1、SLCP2，检测时往含有目标双链DNA的溶液中加入H1、SLCP1和SLCP2，混匀，升温至目标双链DNA变性解链，再降温至温度介于茎环爪探针的熔点温度与双链DNA的熔点温度之间，使得茎环爪探针与互补单链DNA杂交形成杂交复合物，再降温，目标单链DNA识别结合H1，然后往检测溶液中加入H2，引发链式杂交反应，最后根据检测信号变化测定目标双链DNA含量。本发明通过茎环爪探针促进目标单链的释放显著提高双链DNA的检测性能。

主权项

1.一种基于茎环爪探针的双链DNA检测方法，其特征在于，所述双链DNA包括目标单链DNA和互补单链DNA，所述方法包括以下步骤：(1)合成发夹探针：根据目标单链DNA序列设计链式杂交反应发夹探针H1和H2，其中H1中包含与目标单链DNA互补的序列，H2中包含与H1的部分序列互补的序列；所述H1或H2上修饰有信号标记；(2)合成茎环爪探针：根据互补单链DNA序列设计茎环爪探针SLCP1和SLCP2，所述互补单链DNA包括A序列和B序列，SLCP1包括SLCP1e、SLCP1f、SLCP1g三个部分，其中SLCP1f的部分序列与SLCP1g的部分序列互补成双链作为SLCP1发夹爪结构的茎部，SLCP1e与互补单链DNA的A序列互补；SLCP2包括SLCP2h、SLCP2i、SLCP2j三个部分，其中SLCP2h的部分序列和SLCP2i的部分序列互补成双链作为SLCP2发夹爪结构的茎部，SLCP2j与互补单链DNA的B序列互补；所述茎环爪探针SLCP1和SLCP2的熔点大于所述双链DNA的熔点；(3)基于茎环爪探针序列特异性双链DNA检测：往含有目标双链DNA的溶液中加入H1、SLCP1、SLCP2，混匀，升温至目标双链DNA变性解链，再降温至温度介于茎环爪探针SLCP1和SLCP2的熔点温度与双链DNA的熔点温度之间，使得茎环爪探针与互补单链DNA杂交形成杂交复合物，接着降温至室温，在此过程中，目标单链DNA识别结合H1，然后往检测溶液中加入H2，引发链式杂交反应，根据检测溶液的信号变化测定溶液中目标双链DNA的含量。