[发明专利]一种组织工程化神经组织及其构建方法有效
| 申请号： | 201910405991.4 | 申请日： | 2019-05-16 |
| 公开（公告）号： | CN110106148B | 公开（公告）日： | 2020-10-13 |
| 发明（设计）人： | 王常勇;朱惠敏;周瑾;刘伟;王春兰 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 |
| 主分类号： | C12N5/0793 | 分类号： | C12N5/0793;C07K14/435 |
| 代理公司： | 北京成实知识产权代理有限公司 11724 | 代理人： | 叶立涛 |
| 地址： | 100036*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了属于组织工程技术领域的一种组织工程化神经组织及其构建方法。本发明使用蚕丝丝素蛋白和胶原复合材料，以原代皮层神经元为种子细胞进行三维培养，形成一种组织工程化的神经组织。其操作步骤简单，容易重复，没有特殊的工艺或设备要求。该体系下构建的神经组织产生具有丰富网络连接的神经网络。本发明使用到的丝素蛋白其机械性能适合于神经细胞接种及培养，其弹性模量与大鼠脑组织相接近。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 组织 工程 神经 及其 构建 方法 | ||
【主权项】：
1.一种组织工程化神经组织及其构建方法，其特征在于，按照如下步骤进行：(1)制备浓度为6‑12％的丝素蛋白溶液；(2)制备多孔支架，用直径6mm的punch打孔，裁剪支架材料厚度在2‑3mm，接种前进行高压灭菌；(3)分离培养MEF细胞并进行脱细胞处理；(4)分离神经元；(5)细胞接种：细胞接种前，使用培养基浸泡细胞衍生的细胞外基质修饰的支架材料1小时，吸除细胞培养基；使用细胞种植液对细胞进行重悬，接种前吸干支架材料上多余的水分，使用10ul的细胞悬液在材料上进行接种，使每个支架材料上接种2x106cells/scaffold/10μl，然后置于孵箱内过夜，8小时后沿着孔板管壁添加细胞维持液；(6)长期培养：将构建的样品从96孔板转移到24孔板中，并添加细胞维持液，确保构建体完全浸没于培养液中以获取充分的营养交换，接下来的培养需要隔天半量换液。
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