[发明专利]一种毒素胁迫烟草杂种后代抗黑胫病基因型的定向选择方法

摘要

本发明提出了一种毒素胁迫烟草杂种后代抗黑胫病基因型的定向选择方法，离体条件下利用烟草黑胫病病原菌毒素胁迫烟草杂交分离世代种子，利用具不同抗黑胫病基因型种子在胁迫培养基上萌发时胚根及幼苗的生长特性，淘汰毒素敏感、胚根、幼苗生长受抑的萌发苗，筛选毒素胁迫条件下正常生长的抗性苗，进一步获得具不同抗性水平的烟草抗黑胫病基因型的方法。这种利用毒素胁迫烟草杂交后代进行抗黑胫病基因型的鉴选方法，克服了传统杂种后代抗黑胫病基因型鉴定、选择过程漫长、鉴定费力费时、选择效率较低的弊端，为烟草杂种后代抗黑胫病基因型的高效、定向选择提供了新的理论和方法。

主权项

1.一种毒素胁迫烟草杂种后代抗黑胫病基因型的定向选择方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、将烟草黑胫病菌菌种于产毒培养液中产毒培养后，分离得到烟草黑胫病菌粗毒素；所述产毒培养液的制备方法为：在无菌水中加入600g去皮土豆后煮沸，过滤除去土豆，定容至1000mL后加入蔗糖50g、硫酸铵3.0g、硫酸镁0.8g，灭菌分装即为产毒培养液；步骤二、将烟草杂种后代在毒素胁迫选择培养基上胁迫培养；其中，毒素胁迫选择培养基包含体积比为50％的烟草黑胫病菌粗毒素；步骤三、根据胁迫培养的结果，选出对毒素不敏感、种子萌发正常的抗毒素幼苗，通过抗毒素幼苗进一步获得烟草抗黑胫病基因。