[发明专利]一种棉花早期基因沉默方法Si-VIGS

摘要

本申请属于棉花育种技术领域，具体涉及一种棉花早期发芽和幼苗阶段的基因沉默方法。该方法包括：制备转染用农杆菌液、利用烟草进行病毒扩增、侵染棉花种子等步骤。本申请中，以烟草脆裂病毒（TRV）作为病毒载体，对棉花基因沉默技术进行了优化改良。结果证明应用TRV病毒匀浆或农杆菌接种棉花子叶或种子，均可以得到基因沉默表型。对比TRV病毒匀浆与农杆菌接种的异同，发现应用种子吸涨法（Si:Seed imbibition）接种任一侵染液，均可将病毒接种时间提前至种子露白期，并于3天内高效沉默种子发芽期间的功能基因，并且病毒匀浆介导的基因沉默能持续至棉花幼苗期。本发明Si‑VIGS可以从棉花发芽早期高效沉默基因，操作简单，表型统一，表现出较好应用前景。

主权项

1.一种棉花早期基因沉默方法Si‑VIGS，其特征在于，该方法包括如下步骤：（一）制备转染用菌液针对待沉默的目的基因，通过病毒质粒介导转化农杆菌菌株GV3101，制备转染用菌液；（二）利用烟草进行扩增将步骤（一）中的转染用菌液接种烟草叶片，并进行培养，收集含病毒粒子的烟草叶片并制备成病毒侵染液；（三）侵染棉花种子将脱绒棉花种子浸泡萌发后，用步骤（一）中转染菌液在22~24℃条件下，避光浸泡培养1 d；然后移到潮湿蛭石培养3 d；或用步骤（二）中病毒侵染液在22~24℃条件下，避光浸泡培养3 d；然后移到潮湿蛭石培养共培养5~7 d。