[发明专利]太岁组织中菌类存在的鉴定方法及菌类对太岁形成必需性的评定方法

摘要

本发明提供了一种太岁组织中菌类存在的鉴定方法及菌类对太岁形成必需性的评定方法，该鉴定方法为：a、测定太岁组织块的溶解温度；b、制备太岁组织溶解液；c、使用一次性针头滤器过滤太岁组织溶解液，使不能通过滤膜的菌类富集在滤膜上，支原体则通过滤膜保留在滤液中；d、取出步骤c的滤膜并切碎，然后采用CTAB法提取DNA；e、选定五大菌类各自的阳性对照菌，并按步骤b~d相同的方法进行处理；f、五大类菌存在的鉴定：以滤液为扩增模板来鉴定支原体，以滤膜上菌体提取的DNA为扩增模板来鉴定其它4大类菌。应用本发明，可测定出5大类菌的存在状况，准确获得太岁中菌类构成信息，为更快更准地探明其生物属性奠定基础。

主权项

1.一种太岁组织中菌类存在的鉴定方法，其特征是，包括以下步骤：a、测定在水浴10 min时能够使太岁组织块软化成泥并溶解的温度；b、称取≥0.6克的太岁组织块加入到水中，然后在溶解温度下进行水浴保温处理，得到太岁组织溶解液；c、使用滤膜孔径为0.22 µm的一次性针头滤器过滤步骤b所得的太岁组织溶解液，得到太岁组织滤液和富集有菌体的滤膜；d、CTAB法提取滤膜上菌体的DNA，得到太岁组织菌体DNA溶液；e、选取细菌类、古细菌类、真菌类、粘菌类和支原体类的已知菌作为这5大菌类鉴定的各自的阳性对照菌，每个阳性对照菌的湿菌体量≥0.1克，将阳性对照菌按照与太岁组织块步骤b~d相同的处理方法进行处理，得到支原体阳性对照菌滤液和细菌类、古细菌类、真菌类、粘菌类各自阳性对照菌的DNA溶液；f、五大菌类存在的鉴定：f‑1、支原体类的鉴定：以太岁组织滤液和支原体阳性对照菌滤液为模板，进行支原体通用引物扩增，同时以RT‑PCR级别水为阴性对照，扩增产物用琼脂糖凝胶电泳进行检验，在阴性对照无目标条带的前提下，若支原体阳性对照菌有目标条带，表明该方法适用于太岁组织中支原体存在的鉴定，若太岁组织滤液扩增的产物无目标条带，表明对应的取样部位无支原体存在，有目标条带，表明对应的取样部位有支原体存在；f‑2、细菌类、古细菌类、真菌类或粘菌类的鉴定：以太岁组织菌体DNA溶液和4大菌类阳性对照菌DNA溶液为模板，进行各大菌类的通用引物扩增，同时以RT‑PCR级别水为阴性对照，扩增产物用琼脂糖凝胶电泳进行检验，在阴性对照无目标条带的前提下，若4大菌类阳性对照有目标条带，表明该方法适用于太岁组织中细菌类、古细菌类、真菌类和粘菌类的鉴定，若太岁组织菌体DNA溶液的扩增产物无某大菌类目标条带，表明对应的取样部位无该大菌类存在，若有目标条带，表明取样部位有该大菌类存在。