[发明专利]一种利用稳定细胞株生产膜蛋白的方法在审
| 申请号： | 201910424632.3 | 申请日： | 2019-05-21 |
| 公开（公告）号： | CN110184300A | 公开（公告）日： | 2019-08-30 |
| 发明（设计）人： | 雍金贵;张伦;李森 | 申请（专利权）人： | 安徽环球基因科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12P21/02;C12M3/00;C12M1/34;C12M1/26;C12M1/04;C12M1/00 |
| 代理公司： | 北京和信华成知识产权代理事务所(普通合伙) 11390 | 代理人： | 胡剑辉 |
| 地址： | 239000 *** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明公开一种利用稳定细胞株生产膜蛋白的方法，主要包括重组质粒的构建、高表达细胞株的培育与膜蛋白的提取和纯化，本发明运用重组慢病毒载体将膜蛋白基因整合到细胞染色体上，使膜蛋白基因在细胞内能够持续、稳定表达，利于后期大规模培养，解决了现有技术中膜蛋白的过表达对细胞膜蛋白生产的影响，同时本发明通过特制的细胞培养装置来对筛选出的高表达细胞株进行培育，细胞培养装置通过设置多层结构的细胞培育池，并通过无菌采样避免将空气中的杂质引入细胞培育池或对所采集样本造成污染，适用于长期频繁的进行样本采集，适用于规模化的细胞培育。 | ||
| 搜索关键词： | 膜蛋白 细胞培育 细胞培养装置 膜蛋白基因 稳定细胞株 高表达 细胞株 重组慢病毒载体 大规模培养 细胞膜蛋白 细胞染色体 多层结构 稳定表达 样本采集 重组质粒 规模化 采样 构建 无菌 整合 生产 培育 样本 采集 筛选 细胞 引入 污染 | ||
【主权项】：
1.一种利用稳定细胞株生产膜蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、重组质粒的构建以重组慢病毒载体pLenti‑puro为骨架，将目的蛋白基因构建到重组慢病毒载体上获得重组质粒pLenti‑puro‑P；步骤二、高表达细胞株的培育利用PEI转染方法将上述重组质粒与辅助质粒pSPAX2和pMD2G共转染293T细胞获得重组慢病毒；将上一步骤收获的慢病毒转导293T细胞，经嘌呤霉素筛选获得多个单克隆细胞株，细胞培养进行细胞膜制备后，经Elisa方法检测各细胞中目标膜蛋白含量，确定高表达细胞株；将筛选得到的高表达细胞株加入细胞培养装置中进行培育，培育过程中每隔设定时间T1进行采样，对细胞培养装置内的细胞培养液的成分进行测定；步骤三、膜蛋白的提取与纯化。
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