[发明专利]利用酵母组装多个基因片段到py-2u载体的方法及用途有效
| 申请号： | 201910425888.6 | 申请日： | 2019-05-21 |
| 公开（公告）号： | CN110129356B | 公开（公告）日： | 2021-08-17 |
| 发明（设计）人： | 雍金贵;喻明军;苏万凯;施荣辉;王维昆 | 申请（专利权）人： | 通用生物系统（安徽）有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/81 | 分类号： | C12N15/81;C12N15/66 |
| 代理公司： | 北京和信华成知识产权代理事务所(普通合伙) 11390 | 代理人： | 胡剑辉 |
| 地址： | 239000 安徽*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明公开一种利用酵母组装多个基因片段到py‑2u载体的方法及用途，涉及生物工程技术领域。该方法在需要克隆的目的基因两段添加和py‑2u载体同源的同源序列；将得到的基因分为多个小片段，两段添加单独的酶切位点；每个小片段两端的酶切位点为同一个酶切位点，或不同的单独的酶切位点；每个小片段通过基因合成或PCR扩增得到，产物平端连接到克隆载体或TA克隆到小片段载体；将每个片段用单独的酶切位点进行酶切，回收产物后用于下一步的酵母转化。构建的Py‑2uL可被阿拉伯糖诱导提高其在大肠杆菌中的拷贝数，有利于后续的质粒提取等基因操作；可以稳定快速完成长基因的基因合成和组装，相较常规克隆流程更简便，经济高效。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 酵母 组装 基因 片段 py 载体 方法 用途 | ||
【主权项】：
1.利用酵母组装多个基因片段到py‑2u载体的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、在需要克隆的目的基因两段添加和py‑2u载体同源的长度40‑60bp的同源序列；S2、将步骤S1得到的基因分为多个小片段，两段添加单独的酶切位点；每个小片段两端的酶切位点为同一个酶切位点，或不同的单独的酶切位点；S3、每个小片段通过基因合成或PCR扩增得到，产物平端连接到克隆载体或TA克隆到小片段载体；S4、将每个片段用所述单独的酶切位点进行酶切，回收产物后用于下一步的酵母转化。
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