[发明专利]一种实时指示凋亡水平的稳转细胞系及其构建方法和应用在审
| 申请号： | 201910426100.3 | 申请日： | 2019-05-21 |
| 公开（公告）号： | CN110093319A | 公开（公告）日： | 2019-08-06 |
| 发明（设计）人： | 孟春春;丁铲;车路平;孙英杰;谭磊;仇旭升;廖瑛;宋翠萍 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院上海兽医研究所（中国动物卫生与流行病学中心上海分中心） |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/867;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 上海段和段律师事务所 31334 | 代理人： | 李慧;郭国中 |
| 地址： | 201100 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种实时指示凋亡水平的稳转细胞系及其构建方法和应用，所述细胞系含有线性多肽DnaEC‑Fluc‑C‑DEVD‑Fluc‑N‑DnaEN‑PEST，且在Fluc‑C‑DEVD‑Fluc‑N的两端带有NotⅠ和XbaⅠ酶切位点。所述构建方法包括以下步骤：构建含有线性多肽的质粒；包装慢病毒；再感染宿主细胞，进行药物筛选、亚克隆培养。本发明选用萤火虫荧光素酶作为报告基因用以构建含有Caspase‑3识别基序DEVD的稳转细胞系。当凋亡现象发生，DEVD被剪切出来，萤火虫荧光素酶基因的N、C端相互靠近激活发出荧光从而判定凋亡情况。该方法灵敏度高、操作简便且省时高效，有望成为筛选抗肿瘤药物的新方法。 | ||
| 搜索关键词： | 构建 凋亡水平 实时指示 线性多肽 凋亡 萤火虫荧光素酶基因 萤火虫荧光素酶 感染宿主细胞 抗肿瘤药物 报告基因 酶切位点 省时高效 药物筛选 被剪切 灵敏度 慢病毒 亚克隆 荧光 基序 质粒 应用 判定 激活 筛选 | ||
【主权项】：
1.一种实时指示凋亡水平的稳转细胞系，其特征在于，所述细胞系含有线性多肽DnaEC‑Fluc‑C‑DEVD‑Fluc‑N‑DnaEN‑PEST，且在Fluc‑C‑DEVD‑Fluc‑N的两端带有Not Ⅰ和Xba Ⅰ酶切位点。
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