[发明专利]一种海分枝杆菌核酸的快速检测方法及其试剂盒

摘要

本发明公开了一种海分枝杆菌核酸的快速检测方法及其试剂盒，检测方法，包括如下内容：采集海分枝杆菌疑似感染者的脓性分泌物；提取分泌物中的DNA核酸；设计引物和探针；配制海分枝杆菌核酸检测试剂；取病灶分泌物的DNA核酸作扩增模板，进行恒温扩增；待恒温扩增结束后，用一次性核酸检测装置定性判读结果；本发明无需分离培养分枝杆菌，直接从病灶分泌物中检测海分枝杆菌核酸，具有耗时短、操作简便的优点，本发明运用独特的方法设计出的引物和探针，使得检测灵敏度高、特异性好；再通过实验优选出引物探针优选和最优的工作浓度范围，从而进一步提高试剂盒的检测的灵敏度和特异性。

主权项

1.一种海分枝杆菌核酸的快速检测方法，其特征在于，包括如下内容：采集海分枝杆菌疑似感染者的脓性分泌物；提取分泌物中的DNA核酸；设计如下5条引物和探针，SEQ ID NO.1：5’‑TGT ACC TGA AGG AGC GCA GT；SEQ ID NO.2：5’‑Biotin‑GGG CTC CTT TGT TGA GGT TG；SEQ ID NO.3：5’‑6‑FAM‑GTG TCG GAT CGG GCC ACG TC；SEQ ID NO.4：5’‑GGG CTC CTT TGT TGA GGT TGG ACC AGC CGC GCG ATA GCA A；SEQ ID NO.5：5’‑TTG GTT GAC ACT CGA GGC AC；配制海分枝杆菌核酸检测试剂，检测试剂包括：SEQ ID NO.1，SEQ ID NO.2，SEQ ID NO.3，SEQ ID NO.4，SEQ ID NO.5，DNA聚合酶，DNA聚合酶缓冲液，MgSO₄溶液，dNTP，蒸馏水，DNA样品；取病灶分泌物的DNA核酸作扩增模板，进行恒温扩增；待恒温扩增结束后，用一次性核酸检测装置定性判读结果，阳性结果：检测装置出现两条红色的指示线，两条指示线分别位于质控线(C)位置和检测线(T)位置；阴性结果：检测装置出现一条指示线，且位于质控线(C)位置；无效结果：检测装置无指示线出现。