[发明专利]一种BPDE加合靶蛋白的鉴定方法在审
| 申请号： | 201910428945.6 | 申请日： | 2019-05-22 |
| 公开（公告）号： | CN110133136A | 公开（公告）日： | 2019-08-16 |
| 发明（设计）人： | 郑金平;王丹;吕懿;曹彬;穆箭兵 | 申请（专利权）人： | 山西医科大学 |
| 主分类号： | G01N30/02 | 分类号： | G01N30/02;G01N30/72 |
| 代理公司： | 太原科卫专利事务所(普通合伙) 14100 | 代理人： | 张彩琴;李晓娟 |
| 地址： | 030001 *** | 国省代码： | 山西;14 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明涉及BPDE加合靶蛋白的鉴定领域，具体是一种BPDE加合靶蛋白的鉴定方法。该方法包括1）收集细胞及提取蛋白；2）细胞裂解物的染毒及蛋白酶消化；3）质谱前样品准备；4）LC‑MS/MS分析：取肽段进行色谱分离；肽段分离后用质谱仪进行DDA质谱分析；5）质谱数据库检索：下载蛋白质数据库，根据质谱分析数据获得BPDE靶蛋白。该方法可直接鉴定蛋白裂解物中可与BPDE加合的靶蛋白，并且在检测过程中不需要对小分子进行化学修饰、不会影响到小分子原有的活性、不受任何细胞和组织类型限制、不要求使用纯蛋白质，甚至可以使用全细胞裂解物，可广泛应用于小分子加合靶蛋白的鉴定。 | ||
| 搜索关键词： | 靶蛋白 加合 小分子 蛋白质数据库 全细胞裂解物 质谱分析数据 蛋白裂解物 蛋白酶消化 细胞裂解物 质谱数据库 细胞 纯蛋白质 化学修饰 鉴定领域 色谱分离 样品准备 质谱分析 组织类型 肽段分离 染毒 原有的 质谱仪 下载 质谱 肽段 检索 蛋白 检测 应用 分析 | ||
【主权项】：
1.一种BPDE加合靶蛋白的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：1）收集细胞及提取蛋白2）细胞裂解物的染毒及蛋白酶消化蛋白样品分为两份，其中一份加入BPDE的DMSO溶液，另外一份加入等体积的DMSO溶剂，室温下静置孵育，孵育后的样品分别转入两个PCR管中，分别加入嗜热菌蛋白酶，在37℃条件下进行消化，然后分别加入4℃条件下预冷的蛋白酶抑制剂；3）质谱前样品准备加入蛋白酶抑制剂后的样品中分别加入尿素裂解液，4℃条件下离心，收集上清液；然后分别加入二硫苏糖醇，37℃条件下静置；然后冷却至室温后分别加入吲哚乙酸，室温避光下振荡；分别加入碳酸氢铵溶液以及胰蛋白酶，37℃条件下孵育；再分别加入三氟乙酸溶液，终止反应；酶解后的肽段分别使用C18 Cartridge固相萃取柱脱盐，真空冻干，用0.1% 甲酸水溶液复溶，肽段浓度测定，以备LC‑MS/MS分析；4）LC‑MS/MS分析取肽段进行色谱分离；肽段分离后用质谱仪进行DDA质谱分析；5）质谱数据库检索下载蛋白质数据库，根据质谱分析数据筛选出两份蛋白样品间的差异蛋白，获得BPDE靶蛋白。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于山西医科大学，未经山西医科大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201910428945.6/，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇：多种脂溶性维生素的含量测定方法
- 下一篇：木瓜发酵饮料中有机酸含量的检测方法
