[发明专利]一种高效稳定瞬时表达重组蛋白的方法及其应用

摘要

本发明公开了一种高效稳定瞬时表达重组蛋白的方法，通过向细胞悬液中分别添加含有携带目的基因的真核细胞表达载体质粒、DMEM高糖培养基和转染试剂的转染复合物，并在细胞培养过程中进一步添加转染增强子，在培养的不同阶段添加补料培养基，本发明不仅做到高效率、低成本的基因瞬时转染，还实现了快速稳定地表达重组蛋白。

主权项

1.一种高效稳定瞬时表达重组蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：将在无血清培养基中生长好的待转染细胞调整细胞悬液的细胞密度后置于转染摇瓶中；S2：转染复合物的制备：将携带目的基因的真核细胞表达载体质粒加入到DMEM高糖培养基中，涡旋；然后将转染试剂按照质粒：转染试剂的质量比为1:3‑1:10直接加入到上述含有质粒的培养基中，涡旋，将制备的转染复合物在室温下放置10‑20min备用；S3：在上述转染摇瓶中培养细胞2‑4h后，一边摇晃所述转染摇瓶一边将上述转染复合物滴加到所述细胞悬液中，然后将该摇瓶放置在摇床上培养；S4：细胞培养24h后添加2％体积的转染增强子继续培养；S5：分别在细胞培养至48h、96h、144h后添加5％体积的补料培养基；S6：转染后的细胞持续培养5‑7天，然后收获细胞并检测所转染质粒的目的蛋白表达量。