[发明专利]心肌肌钙蛋白I的免标记电化学传感器制备方法及对cTnI的检测方法

摘要

心肌肌钙蛋白I的免标记电化学传感器制备方法及其对cTnI的检测方法，本实验通过现场制备具有电化学活性的Cu‑MOF‑74与生物免疫反应相结合构建了新型的免标记型的BSA/anti‑cTnI/Cu‑MOF‑74/NH2‑rGO/GCE传感器，将传感器与目标分子（心脏标志物cTnI）进行特异性反应，得到心脏标志物抗原‑抗体结合层，从而引起电化学活性Cu‑MOF‑74层“电子转移扰动”，使输出的电化学信号产生规律性变化。该电化学传感器可用于心脏生物标志物的快速、灵敏检测，为心血管疾病患者的早发现、早诊断和早治疗提供可能。

主权项

1.心肌肌钙蛋白I的免标记电化学传感器制备方法，其具体步骤如下：步骤一：将1 mg NH₂‑rGO分散在1 mL超纯水中，超声处理10 min，得到均匀的黑色NH₂‑rGO分散液；步骤二：对裸玻碳电极进行预处理，将预处理好的裸玻碳电极置于2.5%重铬酸钾和10%硝酸的混合溶液中采用恒电位法对其进行氧化处理，使其表面产生‑COOH等含氧活性基团，恒电位法中的电位为+1.5 V，时间为15 s；将氧化过的裸玻碳电极置于200 μL 1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)/ N‑羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化液中进行活化处理2 h，自然晾干后，取10 μL 1.0 mg/mL的NH₂‑rGO滴涂在电极表面并使其自然晾干，从而获得NH₂‑rGO/GCE电极；步骤三：Cu‑MOF‑74/NH₂‑rGO/GCE的制备：配制含20 mM Cu(NO₃)₂∙3H₂O和0.1 M KCl混合溶液作为沉积液，并向此沉积液中通入20 min 氮气以除去溶液中的氧气，将步骤二所得NH₂‑rGO/GCE电极置于除氧后的沉积液中，采用恒电位法在‑0.4 V条件下对其电沉积70 s，电沉积全程需向沉积液中通入氮气以免氧气进入，电沉积之后对电极进行二次水淋洗，晾干，得到Cu/NH₂‑rGO/GCE；配制含0.5 mM 2,5‑二羟基对苯二甲酸的磷酸缓冲盐溶液，通入氮气以除去溶液中的氧气，将Cu/NH₂‑rGO/GCE置于2,5‑二羟基对苯二甲酸的磷酸缓冲盐溶液中，采用循环伏安法在−1.0 V ～ +1.0 V扫描电位区间对其进行20个循环，之后用超纯水淋洗，最后制得Cu‑MOF‑74/NH₂‑rGO/GCE电极；步骤四：心肌肌钙蛋白I的免标记电化学传感器的制备：将步骤三所得Cu‑MOF‑74/NH₂‑rGO/GCE置于200 μL活化液中，在活化处理2 h之后，将其浸泡在200μL含4μg/mL的anti‑cTnI的免疫组化磷酸缓冲盐溶液中，浸泡时间为4 h，二次水淋洗，制得anti‑cTnI/Cu‑MOF‑74/NH₂‑rGO/GCE；最后将anti‑cTnI/Cu‑MOF‑74/NH₂‑rGO/GCE再在200μL 1% 的BSA溶液中浸泡2 h，二次水淋洗，最终制得BSA/anti‑cTnI/Cu‑MOF‑74/NH₂‑rGO/GCE传感器，即为心肌肌钙蛋白I的免标记电化学传感器。