[发明专利]一种HAFFT1细胞的构建方法

摘要

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种HAFFT1细胞的构建方法。该方法将经过由小分子修饰的多肽刺激后的细胞用TCR－T技术进行了改造，改造后的T细胞再进行免疫抑制靶点的敲除，精准的保护了特异性杀伤T细胞免受体内抑制，提高了T细胞对肿瘤细胞的杀伤力。经过HAFFT1方案改造的细胞，识别肿瘤抗原的特异性T细胞(TCR+)比例为80％以上。

主权项

1.一种HAFFT1细胞的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：以精准多肽负载永生化DC细胞，并与PBMC共孵育，制备HAFF’细胞；以精准多肽作为抗原刺激HAFF’细胞，筛选获得能够识别所述精准多肽的特异性T细胞，通过测序得到特异性细胞的高频TCR，敲除原有TCR并进行高频TCR的表达，构建TCR‑T细胞；将上述TCR‑T细胞进行抑制性信号分子的敲除，制备得到HAFFT1细胞；所述精准多肽的制备方法如下：(1)通过对外周血进行ctDNA外显子测序，或者以肿瘤组织进行全外显子测序，筛选出突变位点，进行抗原表位预测，合成突变多肽并进行小分子修饰；将小分子(H)与多肽抗原(P)采用如下链接方式进行修饰(氨基端到羧基端：N‑C)：H‑P、P‑H、H‑P‑H；(2)将外周血中的树突状细胞，采用TAX‑GFP慢病毒进行感染，并选取理想的克隆作为永生DC，并负载所述经小分子修饰过的突变多肽，与PBMC共孵育，获得HAFF细胞；(3)用所述经小分子修饰过的突变多肽作为抗原刺激所述HAFF细胞，通过检查IFN‑γ的分泌筛选获得精准多肽。