[发明专利]一种鉴定山茶花色芽变品种的方法

摘要

本发明公开了一种鉴定山茶花色芽变品种的方法，利用高效液相色谱–光电二极管阵列检测和超高效液相色谱–四极杆–飞行时间质谱联用技术对山茶品种红色花瓣及其粉色与白色芽变品种花瓣中花青苷成分与含量进行研究，结合花色表型分析，对山茶花色芽变进行有效鉴定，明确山茶花色芽变与花青苷之间的关系，揭示山茶花色芽变形成的物质基础，从而为山茶花色芽变育种提供科学依据。

主权项

1.一种鉴定山茶花色芽变品种的方法，其特征在于：所述鉴定方法具体如下：步骤1，花色测定：采集山茶品种测定花色的L*、色相a*值、色相b*值、彩度C*值和色调角h，花色测定位置为花瓣上表皮中央部位，光源为C/2°；每样品测量5朵花的花色，数据列表，取平均值；步骤2，定性分析：取山茶品种新鲜花瓣0.6g，液氮研磨至粉末加提取液2mL，浸提24h后用0.22μm滤膜过滤，滤液保存在‑20℃冰箱备用；利用高效液相色谱–光电二极管阵列检测(HPLC–DAD)和超高效液相色谱–四极杆–飞行时间质谱(UPLC–Q–TOF–MS)联用技术对花瓣中花青苷成分进行定性分析，联用技术采用超高效液相色谱系统和质谱系统，采用UNIFI1.8软件系统，色谱柱为ACQUITY BEH C18(2.1mm×100mm，1.7μm)；流速：0.3mL·min^‑1，进样量：2μL，柱温40℃；以0.1％甲酸水溶液(A)和乙腈(B)为流动相，洗脱程序为0—1.5min，5％B；1.5—11min，5％—40％B；11—14min，40％—95％B；14—16.5min，95％B；16.5—16.8min，95％—5％B；16.8—20min，5％B；电喷雾电离离子源(ESI)，正离子模式，全离子扫描，扫描范围(m/z)：50‑1200u；脱溶剂气体为高纯度氮气，温度为450℃，流速为600L·h^‑1，毛细管电压为1kV，锥孔电压为40V；低能量扫描电压为6eV，高能量扫描电压为20—45eV；根据UPLC–Q–TOF–MS图谱，检测到若干种花青苷成分，根据Cy糖苷在513—520nm有特征吸收峰及碎片离子m/z287，推测若干种花青苷均为Cy型花青苷；步骤3，定量分析：运用HPLC–DAD方法，在525nm处检测花瓣中花青苷；采用标准品半定量法分别计算花瓣中含有的相对于标准品矢车菊素–3–O–β–葡萄糖苷(cyanidin‑3‑O‑β‑glucoside，Cy3G)的花青苷含量，重复3次。