[发明专利]一种测定人血浆中两种抗肿瘤药物浓度的HPLC-MSMS方法

摘要

本发明公开了一种测定人血浆中两种抗肿瘤药物及代谢产物和代谢酶活性相关内源性物质浓度的方法，包括预处理及分别以伏立康唑和溴尿嘧啶为内标，经预处理后样本均使用高效液相色谱分离上清液中的药物成分，然后使用高分辨质谱多反应监测模式进行药物靶向性检测，并进行定量，实现对血浆中两种抗肿瘤药物及代谢产物和代谢酶活性相关内源性物质浓度进行分析测定。本方法在具有快捷性的同时，兼具极高的靶向性，表现出快速、高通量、高灵敏度、特异性强、精密度和准确度良好、稳定性好、提取回收率高、无明显基质效应和稀释效应等优点。本方法可用于临床上伊立替康及其代谢产物和氟尿嘧啶及其代谢酶活性相关内源性物质的血药浓度监测。

主权项

1.一种测定人血浆中两种抗肿瘤药物及代谢产物和代谢酶活性相关内源性物质浓度的方法，其特征在于，所述两种抗肿瘤药物分别是伊立替康和氟尿嘧啶，所述代谢产物是伊立替康的两种代谢产物：7‑乙基‑10‑羟基喜树碱和葡萄糖醛酸化SN‑38；所述代谢酶活性相关内源性物质是氟尿嘧啶代谢酶活性相关内源性物质：尿嘧啶和二氢尿嘧啶；所述方法为高效液相色谱‑串联质谱法，所述方法包括如下步骤：(1)求得第一标准曲线；(2)求得第二标准曲线；(3)血浆样本预处理：取血浆样本，首先加入内标伏立康唑的甲醇水溶液，然后加入含甲酸体积分数0.1％的甲醇沉淀，取上清用氮气吹干后，再用体积分数5％的甲醇水溶液和二氯甲烷复溶，得到第一血浆样本；取血浆样本，首先加入内标溴尿嘧啶的甲醇水溶液，然后加入体积比为：乙酸乙酯：异丙醇＝85:15的溶液沉淀，取上清用氮气吹干后，再用体积分数5％的甲醇水溶液和二氯甲烷复溶，得到第二血浆样本；(4)将步骤(3)预处理后得到的第一、第二血浆样本分别于高效液相色谱质谱联用仪上进样分析：色谱条件：色谱柱为：Waters Atlantis T3柱；流动相为流动相A和流动相B，流动相梯度洗脱条件见下表，流动相A为100％甲醇；流动相B为体积分数为0.1％的甲酸水溶液；时间(min)有机相比例(％)流速(mL/min)2.050.352.1400.355.0400.355.1750.308.5750.309.050.3512.050.35质谱条件：离子源：电喷雾离子源ESI；离子检测方式：多反应监测MRM；质谱检测工作参数见下表：(5)计算：采用内标法，分别将伊立替康/7‑乙基‑10‑羟基喜树碱SN‑38/葡萄糖醛酸化SN‑38与内标伏立康唑的峰面积比值带入第一标准曲线方程分别计算得到血浆中伊立替康、7‑乙基‑10‑羟基喜树碱和葡萄糖醛酸化SN‑38的浓度；将氟尿嘧啶/尿嘧啶/二氢尿嘧啶和内标溴尿嘧啶的峰面积比值带入第二标准曲线方程计算得到血浆中氟尿嘧啶、尿嘧啶和二氢尿嘧啶的浓度。