[发明专利]一种基于排除分子间二硫键干扰特异检测多肽药物的方法

摘要

本发明提供一种基于排除分子间二硫键干扰特异检测多肽药物的方法。所述方法包括添加硬脂酸酰亚胺来封闭多肽样品中的自由巯基，然后添加聚乙醇钠来封闭所述多肽中的分子间二硫键，从而避免其在检测多肽的过程中造成干扰。本发明的方法简单、有效，具有很高的检测灵敏度和准确度，从而具有良好的成本效益。

主权项

1.一种基于排除分子间二硫键干扰特异检测多肽药物的方法，所述方法包括以下步骤：步骤1：准备待检测的多肽样品，并且利用含有0.4%乙醇的水杨酸溶液进行预处理，以消除部分杂质并调节多肽至pH 4‑6；步骤2：向步骤1获得的溶液中添加硬脂酸酰亚胺来封闭多肽样品中的自由巯基；步骤3：通过加酸清除步骤2中过量的硬脂酸酰亚胺，然后向步骤2中获得的溶液中添加聚乙醇钠来封闭所述多肽中的分子间二硫键；步骤4：除掉未结合的封闭试剂，使用0.4%碳酸氢钠将溶液pH调节至7‑9，然后使用特异性还原试剂将被修饰的多肽半胱氨酸巯基还原成自由巯基；步骤5：向步骤4中获得的溶液添加可逆性巯基标记试剂来标记多肽中的自由巯基；和步骤6：对其中的自由巯基进行标记的多肽进行亲和纯化，然后进行高效液相色谱和质谱鉴定。